α-硫辛酸對骨骼肌蛋白質(zhì)沉積的影響及信號通路.pdf

1、骨骼肌蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)受到內(nèi)分泌激素、營養(yǎng)物和炎癥等因素的調(diào)節(jié)。α-硫辛酸（ALA）在能量動態(tài)平衡中起重要作用。因此，本研究的目的是探究ALA對骨骼肌蛋白質(zhì)合成的影響，并揭示其潛在的作用機(jī)制。
　　為了研究ALA對骨骼肌蛋白質(zhì)沉積的影響，本試驗(yàn)在細(xì)胞水平上，選用C2C12細(xì)胞，采用總蛋白/DNA、嘌呤霉素方法、Western Blot、qPCR和免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測C2C12細(xì)胞蛋白質(zhì)沉積及相關(guān)通路蛋白的表達(dá)水平。在活體水平上，選用體重

2、20 g左右3周齡的雄性昆明小鼠，腹腔注射50 mg/kg的ALA3 h后，通過Western Blot和PCR方法檢測腓腸肌蛋白質(zhì)沉積相關(guān)通路蛋白的表達(dá)水平。研究結(jié)果表明：（1）在C2C12細(xì)胞中，添加25μM的ALA可以顯著增加細(xì)胞總蛋白/DNA的比值和嘌呤霉素參與的蛋白質(zhì)合成速度，同時(shí)顯著提高M(jìn)HCⅡ、p-Akt、p-mTOR和p-S6的蛋白表達(dá)，降低AMPK、Ikkα/β和p-eIF2α的蛋白表達(dá)，但對p-4E-BP1的蛋白表達(dá)

3、無顯著影響。（2）小鼠腹腔注射50 mg/kg ALA3 h后，可以顯著提高小鼠腓腸肌中MHCⅡ、p-Akt、p-mTOR、p-S6和p-FoxO1的蛋白表達(dá)，顯著下調(diào)腓腸肌中 p-eIF2α和 p-AMPK的蛋白表達(dá)，但對p-4E-BP1的蛋白表達(dá)無顯著變化。
　　為了研究ALA對骨骼肌蛋白質(zhì)沉積的調(diào)控機(jī)制，本試驗(yàn)在C2C12細(xì)胞水平上進(jìn)行了驗(yàn)證。采用總蛋白/DNA、嘌呤霉素、Western Blot、PCR和免疫共沉淀方法研究

4、其對蛋白質(zhì)合成及炎癥相關(guān)信號通路蛋白表達(dá)的影響。研究結(jié)果表明：（1）25μM ALA分別與500 nM mTOR阻斷劑（雷帕霉素）和5μM PI3K阻斷劑（LY294002）共處理C2C12細(xì)胞后，可以完全顯著降低細(xì)胞總蛋白/DNA的比值和嘌呤霉素參與的蛋白質(zhì)合成速度及下游相關(guān)蛋白的表達(dá)；但25μMALA與0.5 mM AMPK激動劑（AICAR）共處理C2C12細(xì)胞后，對細(xì)胞總蛋白/DNA的比值和嘌呤霉素參與的蛋白質(zhì)合成速度及下游相關(guān)

5、蛋白的表達(dá)無顯著影響。（2）25μMALA處理C2C12細(xì)胞后，可以顯著增加TLR2和MyD88的mRNA表達(dá)；干擾TLR2后，可以顯著抑制細(xì)胞總蛋白/DNA的比值和嘌呤霉素參與的蛋白質(zhì)合成速度，提高下游相關(guān)蛋白的表達(dá)；IP結(jié)果顯示，ALA可以顯著增強(qiáng)MyD88與PI3K亞基p85的結(jié)合。
　　綜上，ALA促進(jìn) C2C12細(xì)胞蛋白質(zhì)合成，其可能的調(diào)控機(jī)制是 ALA通過激活TLR2，促進(jìn)MyD88與PI3K的結(jié)合，進(jìn)而增強(qiáng)Akt/m