檉柳類(lèi)鋅指基因ThZFL的抗逆功能研究.pdf

1、從檉柳(Tamarix hispida)根中的cDNA庫(kù)中分離出一個(gè)與鹽相關(guān)的類(lèi)鋅指基因(ThZFL)。ThZFL基因全長(zhǎng)514bp,開(kāi)放讀碼框自103位的ATG起,止于421位的TAA,為318bp,共編碼105個(gè)氨基酸,推測(cè)其分子量為11.25kD,等電點(diǎn)為9.97。對(duì)其進(jìn)行生物學(xué)信息分析,這個(gè)基因與動(dòng)物鋅指蛋白有部分相似性。
　　 Northern blot分析表明鹽和滲透劑處理都提高了ThZFL在檉柳根部的表達(dá),也能被A

2、BA誘導(dǎo)。亞細(xì)胞定位表明ThZFL蛋白是定位在細(xì)胞壁中的蛋白。
　　 將ThZFL基因克隆到酵母表達(dá)載體pYES2中,轉(zhuǎn)化釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)中,空載體pYES2轉(zhuǎn)酵母為對(duì)照。分別用NaCl和甘露醇脅迫處理轉(zhuǎn)ThZFL與對(duì)照酵母,表明ThZFL基因?qū)}和滲透有抵抗能力。
　　 為進(jìn)一步研究ThZFL的功能,用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將ThZFL基因轉(zhuǎn)入煙草中,以GUS基因作為對(duì)照,得到了轉(zhuǎn)基因煙

3、草。PCR、Southern雜交和Northern雜交檢測(cè)表明ThZFL和GUS基因分別整合到煙草基因組中,并能夠表達(dá)。
　　 選取3個(gè)轉(zhuǎn)ThZFL基因株系的種子及葉片進(jìn)行了非生物脅迫實(shí)驗(yàn),轉(zhuǎn)GUS基因及非轉(zhuǎn)基因煙草作為對(duì)照。分析逆境脅迫條件下非轉(zhuǎn)基因、轉(zhuǎn)GUS基因植株和轉(zhuǎn)ThZFL基因植株種子發(fā)芽率、相對(duì)生長(zhǎng)量及丙二醛(MDA)含量。結(jié)果顯示,脅迫條件下,轉(zhuǎn)ThZFL基因的發(fā)芽率、相對(duì)生長(zhǎng)量明顯高于對(duì)照,丙二醛含量低于對(duì)照。這