檉柳eIF1A基因的功能驗證.pdf

1、1.成功構建了eIF1A基因的酵母表達載體，并進一步通過抗生素篩選、PCR擴增和雙酶切檢測，證實eIF1A基因已連接到酵母表達載體pYES2上;將重組質粒轉化釀酒酵母，通過尿嘧啶缺陷型培養(yǎng)基篩選和PCR檢測，已經(jīng)確定目的基因eIF1A已經(jīng)成功的整合到了酵母的染色體上;Northern雜交結果說明，該基因不僅整合到了酵母的染色體上，而且也正確表達。
　　2.對重組酵母進行了脅迫處理實驗，實驗結果初步表明:eIF1A基因在酵母中的組成

2、型表達能有效改善酵母在NaCl、Na2CO3、冰凍、熱激逆境下的生長狀態(tài)，在一定程度上有效的增強了釀酒酵母的耐鹽性。
　　3.成功地制備了eIF1A基因的工程菌液，利用根癌農桿菌介導法將eIF1A基因轉入山新楊楊基因組中，獲得卡那抗性植株21余株;對21個轉化株系進行PCR檢測，結果15個轉基因株系為陽性，說明該基因已經(jīng)整合到了山新楊基因組中;對轉基因株系進行Northern印跡雜交，證實eIF1A基因在楊樹中能正確表達。

3、　　4.對轉基因山新楊進行1.2Mmol NaCl脅迫實驗，結果表明:轉基因楊樹的耐鹽性明顯高于對照株系;當轉基因植株脅迫9天后，5個轉基因株系和對照株系的SOD、POD和MDA含量變化達到了差異顯著;其中抓基因株系T10表現(xiàn)最佳，其SOD和POD含量是對照的1.19199和2.177倍，對照的MDA含量是轉基因株系T10的2.208倍，從而證明eIF1A基因能夠提高山新楊對鹽脅迫的耐受能力。綜合各個株系各項生理指標的表現(xiàn)，最后確定轉基