山葡萄CBF3基因克隆、載體構(gòu)建及原核表達(dá).pdf

1、低溫是植物生長(zhǎng)過(guò)程中經(jīng)常遇到的一種非生物脅迫。利用分子生物學(xué)手段提高植物抗寒能力已成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。隨著抗寒基因的不斷發(fā)現(xiàn)，已有將抗寒基因?qū)胫参镏胁@得具有抗寒能力轉(zhuǎn)基因植株的報(bào)道。在植物抗寒基因的研究中，導(dǎo)入抗寒相關(guān)基因COR(cold regulated)的轉(zhuǎn)錄激活因子已成為一個(gè)新的思路。CBF(C-repeat bindingfactor)基因能夠識(shí)別并與COR基因啟動(dòng)子區(qū)域的CRT/DRE(C-repeat/dehydra

2、tionresponsive element)順式作用元件特異結(jié)合，誘導(dǎo)其表達(dá)，從而提高植物的抗寒能力。CBF類基因能夠綜合改良植物的抗逆性狀，已成為植物抗寒分子育種的研究熱點(diǎn)。
　　本研究采用RT-PCR技術(shù)對(duì)山葡萄轉(zhuǎn)錄因子CBF3基因進(jìn)行克隆與序列分析;構(gòu)建了CBF3原核表達(dá)載體pGEX-4T-CBF3，研究了其在大腸桿菌中融合表達(dá)的情況;構(gòu)建了山葡萄轉(zhuǎn)錄因子CBF3基因的植物表達(dá)載體pRCBF3。主要研究結(jié)果如下：
　

3、　1.通過(guò)設(shè)計(jì)特異性引物，采用RT-PCR技術(shù)對(duì)山葡萄低溫誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子CBF3基因進(jìn)行了克隆(提交GenBank接受序列號(hào)為EU672969)，得到854bp的cDNA序列。對(duì)CBF3基因進(jìn)行生物信息學(xué)的分析表明，山葡萄CBF3基因開(kāi)放閱讀框?yàn)?20bp，編碼239個(gè)氨基酸;Blastp分析表明山葡萄CBF3基因具有AP2結(jié)合域;預(yù)測(cè)該蛋白相對(duì)分子質(zhì)量為25914.7、等電點(diǎn)為7.02、脂肪系數(shù)為59.29、總平均疏水性為-0.551;