血紅蛋白脂質體對犬的安全性與急性失血性貧血療效試驗.pdf

1、在寵物臨床實踐中，當犬因急性失血危急到生命時，常常需要通過輸血療法進行急救;并常用全血進行輸血，有時則根據病情需要進行成分輸血。由于犬存在的血型多，臨床輸血前需進行交叉配血試驗，尤其對第2次以上接受輸血的犬。交叉配血試驗過程復雜、繁瑣，影響急救的效率，因此，研究血液替代品并用于臨床試驗，是寵物臨床需要解決的重要問題之一。血紅蛋白脂質體（Liposome-encapsulated hemoglobin，LHb）是通過人工制備脂質體包埋血紅

2、蛋白而制成的一種生物制品，又稱為“類紅細胞”，無抗原性。本文通過調整試劑比例，探討包埋率的高低，同時將LHb輸注到健康犬及失血性貧血犬體內，觀察其可行性及對貧血改善效果，為之后的寵物臨床研究與應用提供指導。
　　試驗一、犬血紅蛋白脂質體的制備
　　采用旋轉蒸發(fā)結合超聲振蕩制備血紅蛋白脂質體，主要試劑是大豆卵磷脂、膽固醇、維生素E及氯仿。固定維生素E量不變，設計不同大豆卵磷脂、膽固醇質量比，探討對血紅蛋白包埋率的影響，并測定包

3、埋率最高的血紅蛋白脂質體特性，從多個方面檢測其在體外的穩(wěn)定性。結果表明:當大豆卵磷脂與膽固醇質量比在2∶1時，包埋率最高，達到37.64％。對LHb懸浮液進行血氣檢測，也證實制備的人工紅細胞具有氧親和能力。顯微鏡下觀察的LHb顆粒直徑在4.6-7.9μm之間。通過觀察LHb的外觀顏色變化、檢測滲透率及氧親和力，發(fā)現LHb在4℃的保存時間在1個月左右。
　　試驗二、血紅蛋白脂質體對犬的安全性試驗
　　本實驗研究血紅蛋白脂質體對

4、犬的臨床安全性。選取12只健康成年犬，隨機分成2組每組6只，編號A、B。A組每只犬輸入15 mL脂質體林格氏液，B組每只犬輸入等量LHb懸浮液，每周加強注射1次至第6周，并在試驗第2，4，6，8周觀察記錄各組犬只臨床癥狀表現，檢測血常規(guī)、血液生化、尿常規(guī)指標變化。體內試驗前，先將制備LHb與試驗犬全血進行配型，觀察是否出現紅細胞凝集或溶血反應。結果表明:體外配型試驗未出現紅細胞凝集或溶血反應。LHb組犬只臨床表現會出現短暫異常，部分檢測

5、指標出現非病理性異常，其他各項指標均與A組檢測指標差異不顯著。通過對受試犬生命體征觀察、血常規(guī)、血生化、尿常規(guī)檢測，初步證實了血紅蛋白脂質體對犬只的臨床安全性。
　　試驗三、血紅蛋白脂質體治療犬急性失血性貧血效果觀察
　　為觀察人工制備血紅蛋白脂質體(LHb)對急性貧血患犬的治療效果，建立犬急性失血性貧血病例模型，并使用脂質體包埋犬血紅蛋白作輸血療法。12只犬隨機分成4組，每組3只:空白組（Sham）、輸入血紅蛋白脂質體組(

6、LHb)、輸入自體全血組(SAB)、輸入生理鹽水組(Saline)，分別觀察各組供試犬處理前后的臨床表現，同時測定血常規(guī)、血生化及尿常規(guī)指標。結果表明，LHb與SAB試驗犬相對于Sham及Saline組試驗犬，臨床貧血癥狀均獲明顯改善;第1d時，LHb試驗犬血紅蛋白濃度（167.67±2.96 g/L）明顯高于失血前（135.33±3.18 g/L），第3d開始與SAB組差異不顯著(P＞0.05)。LHb組白細胞(WBC)與嗜中性(Gr