養(yǎng)陰清絡(luò)法對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎骨質(zhì)破壞的干預(yù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、1背景與目的
　　 骨質(zhì)破壞是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoidarthritis，RA)的重要病理改變，至今沒有特別有效的治療藥物，中醫(yī)藥治療具有一定的優(yōu)勢。“陰虛絡(luò)熱”是關(guān)于RA的重要病機(jī)理論，養(yǎng)陰清絡(luò)治法和清絡(luò)通痹方(Qingluo-Tongbiformula,QLT)是針對陰虛絡(luò)熱證制定的有效治法和方藥。本課題旨在研究養(yǎng)陰清絡(luò)治法和清絡(luò)通痹方對RA骨質(zhì)破壞的干預(yù)作用與機(jī)制。
　　 2內(nèi)容與方法
　　 首先

2、通過理論研究探討RA骨質(zhì)破壞的發(fā)病機(jī)制和中醫(yī)病機(jī)，為實(shí)驗(yàn)研究工作假說的提出奠定基礎(chǔ)；繼而按工作假說制定技術(shù)路線，設(shè)計實(shí)驗(yàn)。查閱南京中醫(yī)藥大學(xué)圖書館藏書，并在中國知網(wǎng)(CNKI)檢索中文文獻(xiàn)，在美國斯坦福大學(xué)圖書館網(wǎng)站HighwirePress和Pubmed以及館際互借系統(tǒng)檢索研究英文文獻(xiàn)；侍診導(dǎo)師和名老中醫(yī)，研讀其醫(yī)案，發(fā)掘其經(jīng)驗(yàn)與思想，進(jìn)行理論研究。
　　 在實(shí)驗(yàn)研究中，清絡(luò)通痹方設(shè)大、中、小三個劑量組，對照組選雷公藤多苷(T

3、Ⅱ)為對照藥物，加上模型組和正常對照組有6組。具體實(shí)驗(yàn)包括：建立Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CIA)大鼠模型，光學(xué)顯微鏡觀察藥物對關(guān)節(jié)組織病理的影響；采用小鼠胸腺細(xì)胞增殖法和ELISA法分別檢測藥物對CIA大鼠腹腔巨噬細(xì)胞(Mφ)分泌IL-1和TNF-α的影響；臨床選擇處于活動期并符合陰虛絡(luò)熱證的RA患者，抽取外周靜脈血，加入含藥血清培養(yǎng)，流式細(xì)胞術(shù)檢測T淋巴細(xì)胞RANKL的表達(dá)；臨床獲取行關(guān)節(jié)置換術(shù)RA患者的關(guān)節(jié)滑膜，傳代培養(yǎng)成纖維樣滑膜細(xì)胞

4、(FLS)，加入含藥血清培養(yǎng)，MTT法檢測含藥血清對FLS增殖的影響，RT-PCR檢測RANKLmRNA的表達(dá)；SD大鼠四肢長骨骨髓腔分離骨髓細(xì)胞，采用M-CSF+RANKL誘生破骨細(xì)胞樣細(xì)胞(OLC)，TRAP染色鑒定，加入含藥血清培養(yǎng)，MTT法檢測含藥血清對OLC活性的影響，TRAP試劑盒檢測含藥血清對OLCTRAP活力的影響，光學(xué)顯微鏡觀察含藥血清對OLC在牙質(zhì)表面形成吸收點(diǎn)窩能力的影響。
　　 3結(jié)果
　　 理論

5、研究綜述了RA骨質(zhì)破壞的治療研究進(jìn)展，明確IL-1、TNF-α等炎癥因子以及RANKL/RANK系統(tǒng)和破骨細(xì)胞在RA骨質(zhì)破壞中的關(guān)鍵作用。論述陰虛絡(luò)熱系RA屬熱痹者骨質(zhì)破壞的重要病機(jī)形式，治法宜取養(yǎng)陰清絡(luò)，選方宜用清絡(luò)通痹方。
　　 實(shí)驗(yàn)研究建立了CIA大鼠模型，分組給藥后，正常對照組未出現(xiàn)明顯的關(guān)節(jié)滑膜炎癥及骨質(zhì)破壞等病理現(xiàn)象，而模型組大鼠關(guān)節(jié)滑膜及鄰近軟組織發(fā)生了明顯的炎癥反應(yīng)和關(guān)節(jié)軟骨局部變性壞死，TⅡ和QLT三個劑量組關(guān)

6、節(jié)病變顯著減輕。模型組大鼠腹腔Mφ的IL-1和TNF-α分泌水平明顯高于正常對照組，TⅡ和QLT給藥均可以抑制CIA大鼠腹腔Mφ的IL-1和TNF-α分泌水平?；顒悠赗A患者外周血加入PHA，體外培養(yǎng)72小時，T淋巴細(xì)胞的RANKL表達(dá)率為14.933±7.00％，添加各組含藥血清后的表達(dá)率依次為TⅡ組6.17士3.30％、QLT小劑量組11.62±4.28％、QLT中劑量組8.79±4.08％、QLT大劑量組6.47±3.16％。加入

7、大劑量QLT和TⅡ的動物含藥血清培養(yǎng)FLS72小時后，F(xiàn)LS增殖受到了明顯的抑制，RT-PCR實(shí)驗(yàn)顯示其RANKLmRNA電泳條帶比正常對照組顯著減弱。SD大鼠骨髓細(xì)胞加入M-CSF和RANKL誘導(dǎo)后，經(jīng)顯微鏡觀察和TRAP染色鑒定符合OLC特征，TⅡ和QLT大、中、小三個劑量組含藥血清均可抑制其增殖，TⅡ和QLT中劑量與大劑量組含藥血清可降低OLC的TRAP活力，減少OLC所致骨吸收陷窩面積。
　　 4結(jié)論
　　 養(yǎng)陰