葉下珠提取物對日本血吸蟲感染所致小鼠肝纖維化的影響.pdf

1、目的：
　　 探討中藥葉下珠提取物對阻止血吸蟲蟲卵肉芽腫和肝纖維化形成的分子機制。
　　 方法：
　　 將21只健康的成年雄性Balb/c小鼠隨機分為治療組、模型組、正常組，每組7只。用血吸蟲尾蚴經(jīng)小鼠腹部皮膚同時感染治療組和模型組小鼠，造成小鼠血吸蟲病的動物模型。6周后，血吸蟲感染慢性化，開始給藥。對治療組和模型組小鼠采用吡喹酮兩日療法進行殺蟲治療，劑量為500mg/kg·d，溶于生理鹽水后灌胃。正常組給予等量

2、生理鹽水。殺蟲治療后治療組給予葉下珠提取物生理鹽水溶液灌胃(100mg/kg·d)，同時模型組和正常組給予等量生理鹽水灌胃，1次/日，總共30d。給藥結(jié)束后處死全部小鼠，將一部分肝組織固定于4％多聚甲醛磷酸鹽緩沖液，一部分凍存于液氮罐中。取脾，分離脾細胞，供RNA提取。通過肝組織切片HE染色，比較各組蟲卵肉芽腫大小，通用Masson染色法，對各組肝組織做纖維化評分。堿水解法測定肝組織中羥脯氨酸(hydroxyproline，Hyp)含量

3、，ELISA法測定肝組織勻漿液中白細胞介素13(interleukin13，IL-13)的含量。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR)法檢測各組脾細胞中GATA3 mRNA表達水平。實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(q-RT-PCR)法檢測各組肝組織中精氨酸酶1(arginine1，Arg1)mRNA表達水平。
　　 結(jié)果：
　　 1

4、.光鏡下肝臟病理形態(tài)學(xué)改變：肝組織切片HE染色可見正常組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細胞排列規(guī)則，無蟲卵肉芽腫、肝細胞損害及炎性細胞浸潤。模型組可見蟲卵肉芽腫和嚴重的肝細胞損害，肝細胞呈空泡樣改變，肉芽腫周圍有明顯的炎性細胞浸潤，并有大量纖維結(jié)締組織聚集。治療組肉芽腫范圍較小，肝細胞損害和炎性細胞浸潤都較模型組減輕，纖維結(jié)締組織明顯減少。Masson染色，正常組僅在血管壁和膽管璧有少許膠原分布。模型組可見膠原圍繞肉芽腫分布，匯管區(qū)纖維組織增多

5、，部分肝組織可見小葉間纖維化形成。治療組可見膠原局限于肉芽腫內(nèi)，周邊少有分布，纖維化程度較模型組明顯減輕。
　　 2.肝組織Hyp含量變化：與正常組比較，模型組小鼠肝組織Hyp含量顯著升高(P<0.01)，治療組肝組織Hyp含量較模型組顯著降低(P<0.05)。
　　 3.肝組織IL-13檢測：與正常組比較，模型組小鼠肝組織IL-13水平顯著升高(P<0.01)，治療組肝組織IL-13水平較模型組顯著降低(P<0.05)

6、。
　　 4.脾細胞GATA3 mRNA檢測：模型組表達水平顯著高于正常組，治療組表達水平較模型組顯著降低。
　　 5.肝組織Arg1 mRNA檢測：模型組表達水平與正常組比較顯著降低(P<0.01)，治療組表達水平較模型組顯著降低(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 葉下珠提取物可減少促纖維化型細胞因子IL-13的分泌，下調(diào)脾細胞GATA3 mRNA及肝組織Arg1 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，抑制血吸蟲病肝