運用全內(nèi)反射熒光顯微技術(shù)研究UNC-31-CAPS蛋白在囊泡錨定過程中的作用.pdf

1、神經(jīng)元與神經(jīng)內(nèi)分泌細胞胞吐和胞吞是生命活動的基礎(chǔ)，和許多疾病如甲狀腺功能亢進，巨人癥，重癥肌無力等密切相關(guān)。突觸囊泡（Synaptic Vesicles，SVs）胞吐釋放神經(jīng)遞質(zhì)，而致密核心囊泡（Dense Core Vesicles，DCVs）依賴胞吐分泌激素。
　　 當前研究已經(jīng)確定SVs和DCVs分泌機制是類似的，但SVs和DCvs特征上的差異，比如分泌事件發(fā)生的區(qū)域不同，Svs常發(fā)生在突觸前膜高度特化的活躍區(qū)（activ

2、ezone），DCVs的分泌卻沒有此類特殊的活躍區(qū)域，預示著這兩種分泌的機制有所不同。
　　 UNC-31/CAPS （Ca 2+-dependent activator protein for secretion）蛋白是DCvs胞吐的重要調(diào)控因子，但其作用機理并不清楚。目前，我們已知UNC-31/CAPS 有四個結(jié)構(gòu)域（domain）：C2，PH （pleckstrin homology），MHD （Munc homologu

3、e domain）
　　 和DCV binding domain。我們以線蟲的原代神經(jīng)元作為我們的研究模型，運用分子生物學的方法，在缺失unc-31基因的種系，注射全長cDNA 或缺失上述任意結(jié)構(gòu)域的cDNA，同時用特異的熒光標記物標記ALA 神經(jīng)元中的DCVs，采用全內(nèi)反射熒光顯微技術(shù)（TotAlInternAlReflection Fluorescence Microscopy，TIRFM），研究囊泡胞吐過程中錨定（Dock