茶樹倍性鑒定體系的建立.pdf

1、本文初步研究了茶樹花藥培養(yǎng)的方法，建立了基于FISH技術(shù)的茶樹倍性檢測體系及流式細(xì)胞技術(shù)的基因組DNA含量測定方法，具體研究成果如下：
　　茶樹花藥培養(yǎng)在本實驗室前期花藥培養(yǎng)工作基礎(chǔ)上，進(jìn)一步優(yōu)化培養(yǎng)基，以“舒茶早”、“福云6號”為試材，研究了不同濃度肌醇對花藥培養(yǎng)的影響。結(jié)果表明，過量肌醇促進(jìn)愈傷組織大量形成，不利于茶樹花藥培養(yǎng)。本研究得到了花藥粒膨大，無愈傷形成的花藥離體培養(yǎng)試材，為進(jìn)一步誘導(dǎo)其內(nèi)花粉再生成器官或組織提供了試材

2、。
　　茶樹染色體制片以“舒茶早”為試材，建立了一套基于茶樹無性系根尖的簡單、高效的染色體制片技術(shù)：上午10點左右取茶樹根尖，通過8-羥基喹啉4℃冰箱下預(yù)處理4小時，用卡諾氏溶液4℃冰箱中固定4小時，然后放在1mol/L的鹽酸解離5min，苯酚品紅染色10min后敲片、壓片，顯微鏡觀察。
　　原位雜交以熒光標(biāo)記的小麥45S rDNA為探針，獲得了“舒茶早”根尖原位雜交圖上的6個（3對）信號點，由此推斷“舒茶早”是二倍體品種。

3、
　　DNA含量的測定從DNA含量已知的雞血紅細(xì)胞、玉米、大豆中篩選出適合茶樹DNA含量測定的內(nèi)參—大豆，以大豆（品種Polanka2C=2.5 pg）為內(nèi)參，測得包括“舒茶早”、“白毫早”、“龍井43”、“特香早”、“福鼎大白茶”、“谷雨香”等十幾種茶樹品種的DNA含量。
　　以“龍井43”為參照，對“舒茶早”、“白毫早”、“福云6號”，“政和大白茶”、“杭州大葉”以及“上浮洲”愈傷組織的倍性進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明，“舒茶早

4、”、“白毫早”、“福云6號”為二倍體，“政和大白茶”、“杭州大葉”為三倍體，“上浮洲”愈傷組織為四倍體。
　　茶樹不同組織DNA含量的測定以“舒茶早”為試材，流式細(xì)胞檢測結(jié)果表明其花瓣、嫩葉以及花絲的DNA相對含量略有不同，但都可以作為倍性鑒定的試材，相對于幼葉，花瓣、花絲因次生代謝產(chǎn)物干擾較少，更適于流式細(xì)胞檢測。
　　低溫脅迫對流式細(xì)胞測定結(jié)果的影響以“舒茶早”為試材，將葉片置于4℃冰箱中分別處理2h、4h、8h、12h