高血糖對實驗性角膜及脈絡(luò)膜新生血管影響的研究.pdf

1、背景與目的：
　　 血管新生(angiogenesis)廣泛參與機體的生長發(fā)育、炎癥反應(yīng)、創(chuàng)傷愈合、腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等多個生理、病理過程，如何有效地阻止病理性新生血管的進展一直是生物醫(yī)學領(lǐng)域研究的熱點之一。糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一組以血糖代謝異常為特征的代謝性疾病，隨著生活條件的改善，DM患病率呈逐年上升之勢，長期高血糖狀態(tài)引起的多個系統(tǒng)并發(fā)癥不僅嚴重影響了患者的生活質(zhì)量，亦增加了社會的醫(yī)療負

2、擔。DM可致眼部視網(wǎng)膜血管的過度增生，而在肢端缺血及缺血性心血管疾病中則抑制側(cè)支循環(huán)的建立。DM與新生血管的關(guān)系究竟怎樣?在大血管(macrovascular)和微血管(microvascular)系統(tǒng)中是否起到相同的作用?這些看似矛盾的結(jié)果確切機制是什么?對上述問題的探討有助于各種DM并發(fā)癥的防治，亦有助于更好地調(diào)控新生血管的發(fā)生發(fā)展，從而為阻止疾病的發(fā)展、促進創(chuàng)傷的愈合提供新的思路。
　　 本研究旨在通過鏈脲佐菌素(stre

3、ptozotocin，STZ)誘導(dǎo)小鼠的DM模型，進一步利用堿燒傷誘導(dǎo)角膜新生血管(corneal neovascularization，CNV)形成以及激光誘導(dǎo)的脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovascularization，ChNV)模型，研究高血糖狀態(tài)對眼前、后段局部新生血管發(fā)生過程的影響，比較CNV與ChNV的異同，初步探討高血糖狀態(tài)與角膜及脈絡(luò)膜新生血管的關(guān)系。
　　 材料與方法：
　　 DM小鼠模型

4、的誘導(dǎo)50只BABL/c小鼠及12只C57BL/6小鼠隨機分為實驗組(DM組)及對照組(Con組)，DM組采用STZ多次小劑量注射方法(MultipleLow-Dose Streptozotocin，MLDS)：1％STZ溶液(檸檬酸鹽緩沖液配置)腹腔注射，注射劑量為50mg/kg，連續(xù)注射5 d。Con組采用等量的檸檬酸鹽溶液進行腹腔注射。
　　 CNV模型的研究50只BALB/c小鼠，其中26只經(jīng)腹腔注射STZ后血糖升高，為

5、DM組；另24只注射緩沖液的為Con組。以堿燒傷誘導(dǎo)CNV為模型，在堿燒傷后14 d對兩組角膜的新生血管進行拍照記錄并分析，并將堿燒傷后第14 d小鼠眼球摘除，冰凍切片后行免疫組化CD31染色檢測角膜新生血管；同時各取6只DM組及Con組小鼠堿燒傷后第2 d、4 d及7 d的角膜，提取RNA后進行逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶聯(lián)反應(yīng)(RT-PCT)，分析并比較血管新生相關(guān)細胞因子的表達。
　　 ChNV模型的研究12只C57BL/6小鼠(DM組

6、及Con組各6只)進行眼底激光光凝，第14 d后行眼底血管熒光造影(FFA)及脈絡(luò)膜鋪片熒光染色，比較兩組之間ChNV面積的差異，分析高血糖狀態(tài)對ChNV的影響。
　　 結(jié)果：
　　 經(jīng)MLDS腹腔注射后小鼠隨機血糖均達到成DM模型標準(≥11.1mmol/L)，DM組小鼠較Con組小鼠體重減輕，飲水及尿量明顯增加。
　　 重復(fù)性實驗結(jié)果顯示：堿燒傷誘導(dǎo)后DM組小鼠CNV面積與Con組小鼠相比無統(tǒng)計學差異(P>0

7、.05)。
　　 經(jīng)激光誘導(dǎo)后形成的ChNV面積在DM組小鼠中有所減少，統(tǒng)計分析差異有顯著性(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 經(jīng)MLDS法誘導(dǎo)BALB/c及C57BL/6小鼠成DM具有成模率高、致死率低及高血糖水平維持時間長等特點，可為研究DM相關(guān)的疾病提供較理想的動物模型。
　　 在MLDS誘導(dǎo)的BALB/c DM小鼠中，早期的高血糖狀態(tài)對CNV的發(fā)生及發(fā)展影響不明顯。
　　 在MLDS誘