薏苡仁油注射液抑制LncRNA--PVT1表達影響胃癌細胞耐藥性的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究首先在胃癌耐藥組織和細胞中,利用qPCR檢測了PVT1的表達;然后通過調控PVT1的表達,觀察其對胃癌耐藥細胞中耐藥相關蛋白的影響;隨后利用薏苡仁油注射液處理胃癌耐藥細胞株,觀察PVT1的表達變化;最后通過調控胃癌耐藥細胞中PVT1的表達并利用薏苡仁油注射液處理后,觀察胃癌耐藥相關蛋白的表達變化。最終闡明PVT1在胃癌耐藥性中所扮演的角色及其發(fā)揮功能的分子機制。本研究為深入闡明胃癌耐藥性的分子機制提供了依據,同時為胃癌耐藥性的治療

2、提供了理論基礎。
  研究內容分為4部分:
  1.LncRNA-PVT1對胃癌細胞耐藥性的影響
  目的:分析胃癌耐藥性患者腫瘤組織和胃癌耐藥細胞株中PVT1的表達情況,并進一步在體外觀察PVT1過表達或表達抑制對胃癌細胞耐藥性的影響。
  方法:首先分離順鉑耐藥性和順鉑敏感性胃癌患者腫瘤組織,利用qPCR檢測兩組樣本中PVT1的表達量;而后利用qPCR測定胃癌耐藥細胞株BGC823/DDP和SGC7901/D

3、DP中PVT1的表達量。BGC823/DDP和SGC7901/DDP細胞株分別轉染干擾序列si-PVT1后,利用qPCR測定PVT1的表達量;隨后利用1μg/ml的順鉑分別處理細胞株24 h、36h和48h后,CCK-8檢測細胞的存活率。BGC823和SGC7901分別轉染過表達載體LV-PVTl-GFP后,利用qPCR測定PVT1的表達量;隨后再利用1μg/ml的順鉑處理細胞株48 h后,流式細胞術結合AnnexinⅤ-PI法測定細胞

4、的凋亡率
  結果:胃癌耐藥性患者腫瘤組織和胃癌耐藥細胞株(BGC823/DDP和SGC7901/DDP)中PVT1的表達量顯著上調;PVT1干擾序列顯著降低了胃癌耐藥細胞株中PVT1的表達;胃癌耐藥細胞轉染si-PVT1并用順鉑處理后,顯著降低了胃癌耐藥細胞的存活率,并增加了其凋亡率;胃癌細胞株BGC823和SGC7901轉染LV-PVT1-GFP并利用順鉑處理后,顯著增加了胃癌細胞株中PVT1的表達,并抑制了細胞的凋亡率。

5、r>  結論:胃癌耐藥性患者腫瘤組織及胃癌耐藥細胞株中,PVT1的表達上調;過表達PVT1,增加了胃癌細胞株對順鉑的耐藥性;抑制PVT1的表達,增加了胃癌細胞株對順鉑的敏感性。
  2.PVT1增加胃癌細胞耐藥性的分子機制研究
  目的:體外過表達PVT1,檢測順鉑處理后的胃癌細胞多藥耐藥性相關分子MDR-1、MRP1、mTOR和HIF-1α的表達變化,旨在探討PVT1促進胃癌細胞耐藥性的分子機制。
  方法:構建PV

6、T1過表達載體LV-PVT1-GFP轉染胃癌細胞BGC823和SGC7901,并用順鉑處理48 h后,利用qPCR檢測MDR-1、MRP1、mTOR和HIF-1α的mRNA的表達量;利用western blotting檢測MDR-1和MRP1的蛋白表達量。
  結果:PVT1過表達顯著增加了經順鉑處理的胃癌細胞株中MDR-1和MRP1的表達,而mTOR和HIF-1α的表達量不受PVT1的調控。
  結論:PVT1調控胃癌細胞

7、對順鉑的耐藥性極有可能是通過調控MDR1及MRP1的表達而實現的,而mTOR和HIFα的表達卻不受PVT1的調控而參與胃癌耐藥性機制。
  3.薏苡仁油注射液對胃癌細胞耐藥性的影響
  目的:采用不同濃度薏苡仁油注射液處理胃癌耐藥株細胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP,旨在探討薏苡仁油注射液對胃癌細胞耐藥性的影響。
  方法:選取胃癌耐藥株細胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP,用濃度梯度不同的薏

8、苡仁油注射液(1、2.5、5μl/ml)分別處理24、36、48 h,利用CCK-8檢測細胞活力;薏苡仁油注射液處理48h后,流式細胞術結合AnnexinⅤ-PI法檢測細胞凋亡情況;利用qPCR檢測MDR1和MRP1的mRNA的表達量;利用western blotting測定MDR1和MRP1蛋白表達量。
  結果:利用不同濃度薏苡仁油注射液處理胃癌耐藥株細胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP一段時間后,結果顯示:同一時

9、間點,隨著薏苡仁油注射液濃度的增加,細胞活力顯著降低,而其凋亡率顯著升高;同一濃度的薏苡仁油注射液,隨著處理時間的增加,細胞活力顯著下降,而其凋亡率顯著升高。隨后我們檢測了不同濃度薏苡仁油注射液處理胃癌耐藥株細胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP24 h和48 h后,MDR1和MRP1的表達量。結果顯示:無論處理時間是24 h還是48 h,MDR1和MRP1的表達都隨著處理濃度的增加而顯著降低,呈劑量依賴性。
  結論:

10、薏苡仁油注射液處理胃癌耐藥細胞株促進了細胞的凋亡而抑制了其活性,同時降低了MDR1和MRP1的表達。即表明:薏苡仁油注射液處理顯著降低了胃癌細胞對順鉑的耐藥性。
  4.薏苡仁油注射液抑制胃癌細胞耐藥性的分子機制研究
  目的:體外過表達PVT1,檢測薏苡仁油注射液處理后胃癌耐藥細胞株多藥耐藥性相關分子MDR1、MRP1的表達,旨在探討薏苡仁油注射液抑制胃癌細胞耐藥性的分子機制。
  方法:不同濃度薏苡仁油注射液處理胃

11、癌耐藥細胞株BGC823/DDP和SGC7901/DDP24 h后,qPCR檢測PVT1的表達。PVT1高表達慢病毒轉染胃癌耐藥細胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP后,再利用2.5μl/ml濃度薏苡仁油注射液處理。流式細胞術檢測細胞凋亡率;qPCR檢測MDR1和MRP1的mRNA表達量;western blotting檢測MDR1和MRP1的蛋白表達量。
  結果:不同濃度薏苡仁油注射液處理胃癌耐藥細胞BGC823/D

12、DP和SGC7901/DDP后,PVT1的表達隨著薏苡仁油注射液濃度的增加而顯著降低;PVT1高表達慢病毒轉染胃癌耐藥細胞BGC823/DDP和SGC7901/DDP,并用薏苡仁油注射液處理后,顯著抑制了細胞的凋亡率,同時顯著上調了MDR1和MRP1的表達。
  結論:薏苡仁油注射液通過抑制PVT1降低多藥耐藥性相關分子MDR1和MRP1的表達進而抑制了胃癌細胞耐藥性。
  綜上所述,本文深入探討了PVT1對胃癌耐藥性的影響

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