薏苡仁油防治肥胖微環(huán)境促肺癌的功效與機制研究.pdf

1、肺癌無論是在發(fā)達(dá)國家還是發(fā)展中國家都高居癌癥死亡率的首位。我國越來越嚴(yán)重的空氣污染使肺癌發(fā)病率不斷攀升，中國將成為全球肺癌人數(shù)最多的國家。腫瘤預(yù)防無疑是降低肺癌篩查、治療和死亡率負(fù)擔(dān)的最佳方法，而研究肺癌相關(guān)風(fēng)險因子是預(yù)防肺癌的前提。許多研究證明，肥胖是一個引起癌癥以及癌癥相關(guān)死亡率的危險因素，然而，它在肺癌發(fā)展中扮演的角色仍有爭議。薏苡仁油是從傳統(tǒng)中藥薏苡仁中提取的有效活性成分，其商業(yè)化制劑為康萊特注射液(KLTI)，臨床主要用于不宜

2、手術(shù)的非小細(xì)胞肺癌和原發(fā)性肝癌，與化學(xué)治療結(jié)合能提高有效率，改善生存質(zhì)量和臨床癥狀，減少不良反應(yīng)的發(fā)生。另有研究顯示，薏苡仁油具有減少腹部脂肪的作用，結(jié)合肥胖微環(huán)境促炎作用有利于腫瘤發(fā)展的觀點，本研究猜想，假如肥胖微環(huán)境能促進(jìn)肺癌的發(fā)生發(fā)展，口服薏苡仁油的降脂作用也應(yīng)該能降低肥胖微環(huán)境的促肺癌作用。本研究的目的是證實肥胖微環(huán)境是否促進(jìn)肺癌的發(fā)展以及這種促癌效應(yīng)是否被薏苡仁油減弱。
　　本研究分體外、體內(nèi)和作用機制三部分進(jìn)行。體外研

3、究中，不同濃度薏苡仁油處理細(xì)胞后，MMT法檢測3T3-L1、HUVEC和 LLC細(xì)胞的增殖能力；細(xì)胞劃痕實驗檢測LLC細(xì)胞的遷移能力；伊文思藍(lán)體外滲出性實驗檢測HUVEC細(xì)胞的內(nèi)皮細(xì)胞滲出性；AO/EB染色及油紅O染色分別檢測3T3-L1細(xì)胞凋亡和分化。
　　體內(nèi)研究中，用C57BL/6J和KKay兩個品系的小鼠建立烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌模型、LLC細(xì)胞同種異體移植模型和LLC細(xì)胞原位移植肺癌模型，喂養(yǎng)小鼠高脂飲食（HFD）或標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類

4、動物飲食（SRC），每天灌胃給予薏苡仁油乳。記錄實驗小鼠的體重、自主活動、肺癌發(fā)病率、腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)和肺部轉(zhuǎn)移灶數(shù)等指標(biāo)觀察小鼠生理體征的變化。用HE染色法判斷實驗小鼠肺部的病理學(xué)變化；試劑盒檢測烏拉坦誘導(dǎo)肺癌模型小鼠的胰島素和葡萄糖耐量；免疫組化法檢測烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌模型和原位移植肺癌模型小鼠腫瘤組織EMT，評價超重或肥胖是否促進(jìn)了癌變。
　　為進(jìn)一步探討薏苡仁油肺癌防治機制，用試劑盒檢測烏拉坦誘導(dǎo)肺癌模型小鼠血清胰島素、膽固醇、瘦

5、素、脂聯(lián)素、白介素6（IL-6）、超敏 C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、腫瘤壞死因子（TNF-α）的含量以及氧化應(yīng)激標(biāo)志物活性氧（ROS）、8-羥化脫氧鳥苷（8-OHdG）和血管破裂標(biāo)志物5羥基吲哚乙酸（5-HIAA）的水平；伊文思藍(lán)屏障作用檢測實驗小鼠肺上皮細(xì)胞通透性，干濕重法檢測小鼠肺水含量；Western blot法檢測小鼠的肥胖或癌癥相關(guān)細(xì)胞信號分子的改變，包括酪氨酸激酶（JAK）、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子（STAT3）、蛋白激酶B（

6、Akt）、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、核轉(zhuǎn)錄因子B（NF-κB）以及細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1）。
　　體外結(jié)果顯示，薏苡仁油能顯著抑制3T3-L1細(xì)胞的增殖，但對HUVEC和LLC細(xì)胞增殖抑制作用不明顯；對LLC細(xì)胞的遷移能力無明顯作用；能減弱HUVECs上皮細(xì)胞通透性；促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞的凋亡和分化。
　　體內(nèi)結(jié)果顯示，與SRC飲食小鼠相較，HFD飲食的C57BL/6J小鼠表現(xiàn)為超重、KKay小鼠表現(xiàn)為肥胖；

7、兩個品系的HFD飲食小鼠均表現(xiàn)出體重增長過快，自主活動量降低，烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌和LLC細(xì)胞原位移植肺癌發(fā)病率升高、腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)增多，LLC細(xì)胞同種異體移植腫瘤增大、肺部轉(zhuǎn)移灶增多，肺組織病理結(jié)構(gòu)出現(xiàn)異常、小鼠生存期縮短、死亡率升高。長期使用薏苡仁油治療使兩個品系的HFD飲食小鼠均表現(xiàn)出體重降低，自主活動量增加，烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌和LLC細(xì)胞原位移植肺癌發(fā)生率降低、腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)減少，LLC細(xì)胞同種異體移植腫瘤減小、肺部轉(zhuǎn)移灶減少，肺組織病理結(jié)構(gòu)

8、異常改善。
　　機制研究表明，HFD飲食使兩個品系的烏拉坦誘導(dǎo)肺癌模型小鼠的葡萄糖和胰島素耐量升高；血清胰島素、膽固醇、瘦素、脂聯(lián)素、IL-6、hs-CRP、TNF-α水平升高；氧化應(yīng)激標(biāo)志物ROS、8-OHdG水平升高；血管破裂標(biāo)志物5-HIAA含量增加；肺上皮細(xì)胞通透性和肺水含量增加；JAK、STAT3、Akt、mTOR、NF-κB和cyclin D1等相關(guān)細(xì)胞信號分子表達(dá)升高，這些改變促進(jìn)了癌變過程中肺上皮細(xì)胞增殖和上皮間質(zhì)