D-環(huán)絲氨酸對條件性恐懼消退訓練大鼠行為及海馬BDNF及其受體TrkB的影響研究-.pdf

1、創(chuàng)傷后應激障礙(posttraumatic stress disorder， PTSD)是個體經歷威脅性事件或嚴重創(chuàng)傷時，延遲出現(xiàn)并長期持續(xù)的一種精神障礙。近年來，隨著各種災難性事件的頻繁發(fā)生，PTSD 發(fā)病率呈上升趨勢，然而PTSD的發(fā)病機制并不是很清楚，導致其治療存在很多難點。臨床常采用暴露療法治療PTSD，然而約40％患者已消退的恐懼記憶容易再現(xiàn)，暴露療法的原理為條件性恐懼記憶的消退，因此研究消退記憶長期保持的機制對促進PTSD的

2、臨床治療效果具有十分重要的意義。
　　 海馬是學習記憶的重要腦區(qū)，海馬內神經元的長時程增強效應(LTP)是長時記憶的神經基礎。PTSD與海馬結構與功能的異常存在密切聯(lián)系。BDNF能夠促進神經元的分化生長，增強突觸可塑性，促進長時記憶的保持，在條件性恐懼消退記憶的保持中具有重要作用。海馬BDNF 可能對條件性恐懼消退的長期保持具有重要的作用。本研究通過D-環(huán)絲氨酸(DCS)系統(tǒng)給藥，觀察恐懼消退訓練后不同時間點的消退保持成績與海馬

3、內BDNF及其受體TrkB的關系，為進一步認識消退的機制、尋找治療PTSD的新靶點、提高PTSD 臨床治療的效果提供實驗依據。
　　 方法：將大鼠隨機分為正常組、消退對照組(不進行消退訓練)、消退組、DCS+消退組(消退訓練前腹腔注射DCS)與消退+DCS組(消退訓練后腹腔注射DCS)。利用聲音-電擊配對建立條件性恐懼動物模型，24h后利用相同的聲音刺激進行消退訓練，在消退訓練后1d、3d、7d時測量僵立行為和曠場行為。利用we

4、stern blot技術檢測正常對照組、消退組與消退+DCS組的海馬內BDNF與TrkB 受體的水平。
　　 結果：
　　 實驗一結果：
　　 1.僵立行為測試：消退對照組與消退組的僵立時間百分比隨時間進展整體呈下降趨勢。與正常對照組相比，消退對照組與消退組大鼠的僵立時間百分比均顯著升高(p＜0.01)，且消退對照組顯著高于消退組(p＜0.05)。消退+DCS組的僵立時間百分比顯著低于消退組及DCS+消退組 (p

5、＜0.01)。消退訓練后DCS 干預大鼠3天組與7天組的僵立時間百分比與1天組相比均具有顯著的差異(p＜0.01)。
　　 2.曠場行為測試：
　　 總路程在各組間均無顯著差異。消退對照組與消退組的中央路程百分比(％)與正常對照組相比均顯著降低(p＜0.01)。消退對照各時間組及消退1天組的站立次數均顯著低于正常對照組(p＜0.01)，消退3、7天組的站立次數與正常對照組比較則無顯著差異，且消退對照組與消退組各對應的時間

6、點上的站立次數比較均無統(tǒng)計學差異。
　　 消退對照組內，中央路程百分比(％)在3天組與7天組之間存在顯著差異(p＜0.01)，其余差異均不顯著。消退組內，中央路程百分比(％)的3天組和7天組均與1天組存在顯著差異(p＜0.05)。與正常對照組相比，DCS+消退組的中央路程百分比在各時間點均顯著降低(p＜0.05)。消退+DCS組在1天和3天時的中央路程百分比顯著低于正常對照組(p＜0.05)，7天時的中央路程百分比則與正常對照組

7、無顯著差異。DCS+消退組7天時的中央路程百分比顯著高于1天和3天(p＜0.05)。消退+DCS組7天時的中央路程百分比顯著高于1天和3天(p＜0.05)。
　　 與正常對照組相比，DCS+消退組與消退+DCS組在各時間點的站立次數均顯著降低(p＜0.05)。DCS+消退組與消退+DCS組在各時間點的站立次數與消退組相比均無顯著差異。DCS+消退組與消退+DCS組組內三個時間點之間站立次數比較均無顯著差異。
　　 實驗二

8、結果：
　　 1.海馬BDNF水平：消退組與消退+DCS組在消退訓練后1d、3d時的BDNF表達水平均明顯下降(p＜0.05)，7d時的BDNF表達水平與正常對照組比較則無顯著的差異。消退組與消退+DCS組7d時的BDNF水平較各同組內1d、3d時均顯著升高(p＜
　　 0.05)，而1d與3d的BDNF蛋白水平兩組均無顯著差異。消退組與消退+DCS組在1d與7d時兩組間BDNF水平無顯著差異，而3天時消退+DCS組的B

9、DNF水平則顯著高于消退組(p＜0.05)。
　　 2.海馬TrkB水平：與正常對照組相比，消退組大鼠的TrkB表達水平顯著下降(p＜0.05)。消退組7d時的TrkB表達水平顯著高于1d及3d時(p＜0.05)。消退+DCS組消退訓練后1d與3d時的TrkB表達水平顯著低于正常對照組(p＜0.05)，7d時的表達水平與正常對照組相比則無顯著差異。消退+DCS組7d時的TrkB表達水平顯著高于1d及3d時(p＜0.05)。消退組

10、與消退+DCS組在1d與3d時兩組間BDNF水平無顯著差異，而7天時消退+DCS組的BDNF水平則顯著高于消退組(p＜0.05)3. 消退組與消退+DCS組第1、3、7天CA1區(qū)BDNF與CA3 區(qū)TrkB 陽性細胞數呈逐漸增加趨勢，消退+DCS組第7天基本恢復正常。
　　 結論:
　　 1.DCS 系統(tǒng)給藥，促進了條件恐懼消退記憶的長期保持的同時，亦促進了大鼠海馬BDNF及其高親和力受體TrkB的表達。BDNF通過與其

11、高親和力受體TrkB 結合來發(fā)揮其對學習與記憶的作用。由此可以推測，NMDA 受體介導的分子信號通路在條件恐懼消退記憶的長期保持過程中發(fā)揮著重要的作用。作為NMDA 受體信號通路的下游物質，BDNF與其受體TrkB在消退長時記憶的鞏固及保持起著關鍵的作用。
　　 2.DCS的給藥時機，對條件性恐懼消退記憶的影響表明消退訓練前給藥不能促進消退記憶的保持，而消退訓練后給藥則能夠有效地促進條件恐懼消退記憶的長期保持與鞏固。提示臨床治療