蘋果種質(zhì)資源玻璃化法超低溫保存技術(shù)及其遺傳變異分析.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文蘋果種質(zhì)資源玻璃化法超低溫保存技術(shù)及其遺傳變異分析姓名：劉云國申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：王曉云2002.6.1(2)劉云國：蘋果種質(zhì)資源玻璃化法超低沮保存技術(shù)及其遺傳變異坌塹其組成為MS40％甘油45％蔗糖lO％乙二薛10％DMSO(w／v)。單獨使用PVS3時以90rain的處理時間最佳。采用分步脫水，即將PVS3稀釋2倍和4倍后，分別處理25rain和30rain，然后再用PVS3

2、處理80rain的效果更好5試驗結(jié)果表明，莖尖在液氮中的凍存時間不影響成活率。而不同的化凍方法對細胞活力影響較大，35～40“C的水浴化凍法得到的莖尖細胞活力最高，是較好的化凍方式?；瘍龊笥肕SI2too!L4的蔗糖溶液清洗浸泡30min清洗過的莖尖接種到去掉NH4的恢復(fù)培養(yǎng)基MSBA06mgL1NAA01nagL。GA305mgL“上，經(jīng)過20～30d的生長遲滯期后，進入正常生長，同未經(jīng)凍存的對照生長量一致。不同基因型的蘋果超低溫保存

3、耐受力不一樣，在試驗的6個品種中，“世界一”的成活率最高(8J％)。6凍存后恢復(fù)生長的小苗可以順利生長、生根，其外部形態(tài)與生長發(fā)育情況與對照植株未見差異比較對照與凍存再生苗葉片及莖的可溶性蛋白SDSPAGE譜帶及POD同工酶圖譜束發(fā)現(xiàn)差異，RAPD擴增結(jié)果也來見有差異。這說明凍存后再生植株在形態(tài)、生化和分子農(nóng)平上的遺傳穩(wěn)定性，初步證明了該保存方法應(yīng)用于蘋果種質(zhì)資源保存的可行性?！埃?，1，關(guān)鍵詞：蘋腳質(zhì)資源；莖尖；玻璃化法；超低溫保存；遺