獼猴桃屬植物的遺傳多樣性及種質(zhì)超低溫保存研究.pdf

1、稱猴桃屬植物的遺傳多樣性及種質(zhì)超低溫保存研究摘要中國是稱猴桃屬植物的起源和分布中心，種質(zhì)資源極為豐富，可為稱猴桃遺傳改良和資源利用提供廣泛的背景材料。長期以來，對稱猴桃屬植物的遺傳多樣性尤其是DNA水平上的遺傳多樣性及種質(zhì)的超低溫保存缺乏系統(tǒng)研究。鑒于此，作者以重要分布區(qū)之一的江西稱猴桃屬植物為對象，在查清其種類、分布及若干性狀評價的基礎(chǔ)上，進行AFLP分析與種質(zhì)超低溫保存的研究。主要結(jié)果如下:1江西稱猴桃屬植物的分布及若干性狀評價(1

2、)通過野外實地調(diào)查與查閱標本，對江西稱猴桃屬(Actinidia)植物的分布狀況進行系統(tǒng)研究，基本查清了其分布種類及規(guī)律。結(jié)果表明，江西境內(nèi)分布有稱猴桃屬植物20種11變種，其中葛棗稱猴桃(Actinidia.polygamya(Sieb.etZucc.)Maxim.)、灰毛稱猴桃(A.cinerascensC.F.Liang)、楔葉稱猴桃(A.fasciculoidesvarcuneataC.F.Liang)和簇花稱猴桃(A.fasc

3、iculoidesC.F.Liang)為江西首次發(fā)現(xiàn)。依據(jù)其種類與變種的多樣性形態(tài)特征，編制了江西稱猴桃屬植物分類檢索表。(2)江西稱猴桃屬植物的地理分布區(qū)域較廣，中華稱猴桃在全省各地均有分布，各種類與變種之間對氣候及土壤等生態(tài)條件要求的多樣性導致其地理分布的廣泛性。其區(qū)系特征主要表現(xiàn)為:種類豐富，特有現(xiàn)象較明顯，江西分布國有特產(chǎn)種17種，占國產(chǎn)該屬特有種的30.4%，其中有2種為江西特有種間、種內(nèi)分化較強烈，江西稱猴桃屬植物的種與變種

4、在該屬4個組均有代表與鄰近地區(qū)稱猴桃屬植物的關(guān)系密切，其中與福建關(guān)系最為密切。(3)通過對主要種與變種果實性狀觀測、營養(yǎng)成分和氨基酸含量測定，表明江西稱猴桃屬植物在果實形狀、毛被狀況、果皮色澤、果肉色澤、果實風味、果實vc含量及氨基酸含量方面存在豐富的多樣性。(4)對江西稱猴桃屬植物中的矮型(贛稱5號)和耐貯(973)中華稱猴桃特異種質(zhì)資源進行了初步研究，為其保存與利用莫定基礎(chǔ)。2稱猴桃屬植物的AFLP分析(1)4種經(jīng)優(yōu)化的稱猴桃基因組

5、DNA提取方法即CTAB區(qū)室法、SDS區(qū)室法、CTAB常規(guī)法、SDS常規(guī)法均適于提取稱猴桃嫩葉基因組DNA。經(jīng)綜合對比分析，認為CTAB區(qū)室法為稱猴桃屬植物AFLP分析的最佳方法，其步驟簡單、快捷，抽室溫下用2molLGly十0.4molL蔗糖預處理30min，再于?！嫦掠肞VSZ脫水處理40min，換一次新鮮的PVSZ溶液后，迅速投入到LN中。保存24h后，在400C水浴中化凍，用3%蔗糖MS基本培養(yǎng)基洗滌兩次后接種到恢復培養(yǎng)基上，可

6、獲得56.7%的成活率和51.6%的再生率。超低溫保存后的稱猴桃無菌小苗在形態(tài)上與對照一致。(4)應用流式細胞儀和TEM對超低溫保存后的材料進行倍性檢測以及超低溫保存過程中細胞的超微結(jié)構(gòu)變化進行觀察。結(jié)果表明，其染色體倍性未發(fā)生變異。在含3%蔗糖的Ids培養(yǎng)基上，5℃低溫下鍛煉6周后的莖尖以及在0℃下PVSZ脫水處理40min后的莖尖，細胞發(fā)生的質(zhì)壁分離逐漸加重在LN中保存24h迅速解凍后的莖尖，有部分細胞雖然細胞結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，但程度