獼猴桃屬植物的遺傳多樣性及種質(zhì)超低溫保存研究.pdf

1、稱猴桃屬植物的遺傳多樣性及種質(zhì)超低溫保存研究摘要中國(guó)是稱猴桃屬植物的起源和分布中心，種質(zhì)資源極為豐富，可為稱猴桃遺傳改良和資源利用提供廣泛的背景材料。長(zhǎng)期以來(lái)，對(duì)稱猴桃屬植物的遺傳多樣性尤其是DNA水平上的遺傳多樣性及種質(zhì)的超低溫保存缺乏系統(tǒng)研究。鑒于此，作者以重要分布區(qū)之一的江西稱猴桃屬植物為對(duì)象，在查清其種類、分布及若干性狀評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行AFLP分析與種質(zhì)超低溫保存的研究。主要結(jié)果如下:1江西稱猴桃屬植物的分布及若干性狀評(píng)價(jià)(1

2、)通過(guò)野外實(shí)地調(diào)查與查閱標(biāo)本，對(duì)江西稱猴桃屬(Actinidia)植物的分布狀況進(jìn)行系統(tǒng)研究，基本查清了其分布種類及規(guī)律。結(jié)果表明，江西境內(nèi)分布有稱猴桃屬植物20種11變種，其中葛棗稱猴桃(Actinidia.polygamya(Sieb.etZucc.)Maxim.)、灰毛稱猴桃(A.cinerascensC.F.Liang)、楔葉稱猴桃(A.fasciculoidesvarcuneataC.F.Liang)和簇花稱猴桃(A.fasc

3、iculoidesC.F.Liang)為江西首次發(fā)現(xiàn)。依據(jù)其種類與變種的多樣性形態(tài)特征，編制了江西稱猴桃屬植物分類檢索表。(2)江西稱猴桃屬植物的地理分布區(qū)域較廣，中華稱猴桃在全省各地均有分布，各種類與變種之間對(duì)氣候及土壤等生態(tài)條件要求的多樣性導(dǎo)致其地理分布的廣泛性。其區(qū)系特征主要表現(xiàn)為:種類豐富，特有現(xiàn)象較明顯，江西分布國(guó)有特產(chǎn)種17種，占國(guó)產(chǎn)該屬特有種的30.4%，其中有2種為江西特有種間、種內(nèi)分化較強(qiáng)烈，江西稱猴桃屬植物的種與變種

4、在該屬4個(gè)組均有代表與鄰近地區(qū)稱猴桃屬植物的關(guān)系密切，其中與福建關(guān)系最為密切。(3)通過(guò)對(duì)主要種與變種果實(shí)性狀觀測(cè)、營(yíng)養(yǎng)成分和氨基酸含量測(cè)定，表明江西稱猴桃屬植物在果實(shí)形狀、毛被狀況、果皮色澤、果肉色澤、果實(shí)風(fēng)味、果實(shí)vc含量及氨基酸含量方面存在豐富的多樣性。(4)對(duì)江西稱猴桃屬植物中的矮型(贛稱5號(hào))和耐貯(973)中華稱猴桃特異種質(zhì)資源進(jìn)行了初步研究，為其保存與利用莫定基礎(chǔ)。2稱猴桃屬植物的AFLP分析(1)4種經(jīng)優(yōu)化的稱猴桃基因組

5、DNA提取方法即CTAB區(qū)室法、SDS區(qū)室法、CTAB常規(guī)法、SDS常規(guī)法均適于提取稱猴桃嫩葉基因組DNA。經(jīng)綜合對(duì)比分析，認(rèn)為CTAB區(qū)室法為稱猴桃屬植物AFLP分析的最佳方法，其步驟簡(jiǎn)單、快捷，抽室溫下用2molLGly十0.4molL蔗糖預(yù)處理30min，再于?！嫦掠肞VSZ脫水處理40min，換一次新鮮的PVSZ溶液后，迅速投入到LN中。保存24h后，在400C水浴中化凍，用3%蔗糖MS基本培養(yǎng)基洗滌兩次后接種到恢復(fù)培養(yǎng)基上，可

6、獲得56.7%的成活率和51.6%的再生率。超低溫保存后的稱猴桃無(wú)菌小苗在形態(tài)上與對(duì)照一致。(4)應(yīng)用流式細(xì)胞儀和TEM對(duì)超低溫保存后的材料進(jìn)行倍性檢測(cè)以及超低溫保存過(guò)程中細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行觀察。結(jié)果表明，其染色體倍性未發(fā)生變異。在含3%蔗糖的Ids培養(yǎng)基上，5℃低溫下鍛煉6周后的莖尖以及在0℃下PVSZ脫水處理40min后的莖尖，細(xì)胞發(fā)生的質(zhì)壁分離逐漸加重在LN中保存24h迅速解凍后的莖尖，有部分細(xì)胞雖然細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，但程度