腎小球腎炎中足細(xì)胞UCH-L1的表達(dá)及其相關(guān)因素初步研究.pdf

1、泛素-蛋白酶體途徑是調(diào)控細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)代謝的一個(gè)重要途徑，它在很多細(xì)胞活動(dòng)，包括細(xì)胞周期、信號(hào)傳導(dǎo)、受體功能、發(fā)育分化中起調(diào)節(jié)作用。該途徑是一個(gè)受多種因素調(diào)控的可逆過程，這其中存在一些特異性的去泛素化蛋白酶的參與。泛素羧基末端水解酶-1(UCH-L1)，又名蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP9.5)，就是去泛素化酶家族中的重要一員。UCH-L1在正常狀態(tài)下的組織分布十分有限，目前的文獻(xiàn)報(bào)道僅限于神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)和腎臟。相比而言，有關(guān)UCH-L1

2、與疾病相關(guān)性的研究較多。大量研究表明UCH-L1的改變與神經(jīng)退行性病變的發(fā)病有關(guān)，在很多類型的腫瘤細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)了UCH-L1的異常高表達(dá)。腎臟方面，有文獻(xiàn)報(bào)道在人和大鼠的正常及病變腎組織的腎小球壁層上皮細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞中檢測(cè)到了UCH-L1的表達(dá)，在腎癌和腎間質(zhì)腫瘤中也發(fā)現(xiàn)了UCH-L1的過表達(dá)，但其在腎小球毛細(xì)血管襻內(nèi)是否表達(dá)還不清楚。
　　 為明確腎小球內(nèi)是否存在UCH-L1的表達(dá)，本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)臨床收集的98例腎穿標(biāo)本及

3、腎癌旁正常組織標(biāo)本進(jìn)行了UCH-L1的免疫組化檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)UCH-L1不僅表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞和球囊壁細(xì)胞，還表達(dá)于腎小球毛細(xì)血管襻內(nèi)，且多分布于血管襻邊緣。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還發(fā)現(xiàn)小球內(nèi)UCH-L1的表達(dá)水平在不同病理類型的腎小球腎炎中存在較大的差異。與癌旁正常組織相比，UCH-L1的表達(dá)在輕微病變、微小病變病和局灶節(jié)段性腎小球硬化癥的腎小球中基本沒有改變，而在急性彌漫增生性腎炎、狼瘡性腎炎、膜性腎炎和IgA腎病的小球內(nèi)則明顯升高，其差異有統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 石蠟切片上顯示UCH-L1的小球內(nèi)表達(dá)近似于足突細(xì)胞的分布，為了證實(shí)這一猜想，我們對(duì)腎穿標(biāo)本運(yùn)用免疫熒光雙標(biāo)和免疫電鏡的方法，發(fā)現(xiàn)UCH-L1明確表達(dá)于某些腎小球。腎炎的足細(xì)胞胞漿及足突中。
　　 免疫組化的統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明在某些腎小球腎炎，如急性彌漫增生性腎炎、狼瘡性腎炎中足細(xì)胞UCH-L1的表達(dá)較癌旁正常組織明顯升高。為了探究足細(xì)胞UCH-L1表達(dá)升高的可能誘因，實(shí)驗(yàn)選取了一些常見的炎癥

5、相關(guān)因子TGF-β1、TNF-α、IL-1以及抗鼠胸腺細(xì)胞抗體(可形成致腎炎免疫復(fù)合物)和含補(bǔ)體的新鮮人血清，對(duì)體外培養(yǎng)的正常大鼠足細(xì)胞進(jìn)行刺激，結(jié)果顯示正常大鼠足細(xì)胞中存在基礎(chǔ)水平的UCH-L1表達(dá)，細(xì)胞因子TGF-β1、TNF-α、IL-1短時(shí)間內(nèi)對(duì)足細(xì)胞的UCH-L1表達(dá)沒有明顯影響，而免疫復(fù)合物是引起足細(xì)胞UCH-L1表達(dá)升高的一個(gè)主要原因。補(bǔ)體可誘導(dǎo)足細(xì)胞UCH-L1早期一過性的表達(dá)升高。
　　 研究發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞，如非

6、小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞、腸癌細(xì)胞及腎癌細(xì)胞中UCH-L1的異常高表達(dá)與癌細(xì)胞增生的異常調(diào)控有關(guān)；UCH-L1還表達(dá)于生殖細(xì)胞并調(diào)控著細(xì)胞的增殖、凋亡及分化；UCH-L1表達(dá)升高的腎小管上皮細(xì)胞表現(xiàn)為增生和代謝活躍。這些資料都提示UCH-L1的表達(dá)與細(xì)胞生長(zhǎng)之間存在一定的聯(lián)系。因此我們進(jìn)一步研究了腎小球腎炎時(shí)足細(xì)胞中UCH-L1的表達(dá)升高與足細(xì)胞損傷后再生修復(fù)的關(guān)系。我們對(duì)收集的腎穿標(biāo)本進(jìn)行了PCNA的免疫組化檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)存在有明顯免疫復(fù)合物

7、沉積的急性彌漫增生性腎炎和狼瘡性腎炎的足細(xì)胞中PCNA表達(dá)陽性的細(xì)胞比例相比于正常組織、微小病變病和局灶節(jié)段性腎小球硬化癥明顯升高，而各類腎小球腎炎的小球內(nèi)足細(xì)胞總數(shù)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)免疫復(fù)合物刺激后大鼠足細(xì)胞的PCNA蛋白表達(dá)升高，同時(shí)P27表達(dá)降低。這些數(shù)據(jù)說明免疫復(fù)合物所致?lián)p傷誘導(dǎo)了足細(xì)胞的再生修復(fù)反應(yīng)，免疫復(fù)合物刺激下足細(xì)胞UCH-L1的表達(dá)升高可能與足細(xì)胞的再生修復(fù)密切相關(guān)，可以作為腎小球腎炎時(shí)足細(xì)胞損傷的一種

8、標(biāo)志。
　　 綜上所述，本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在人腎組織中除了已報(bào)道的小管上皮和球囊壁上皮有UCH-L1表達(dá)外，足細(xì)胞也表達(dá)UCH-L1，且其表達(dá)水平在不同病理類型的腎小球腎炎中存在差異，其中以狼瘡性腎炎和急性彌漫增生性腎炎中的表達(dá)升高較為顯著。體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)免疫復(fù)合物是足細(xì)胞UCH-L1表達(dá)升高的一個(gè)主要誘因。足細(xì)胞UCH-L1表達(dá)升高與足細(xì)胞損傷脫失后的再生修復(fù)反應(yīng)可能存在一定的聯(lián)系。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果有助于加深對(duì)免疫復(fù)合物介導(dǎo)的腎