絲素蛋白支架構(gòu)建組織工程化口腔黏膜固有層修復(fù)頰粘膜缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 探討應(yīng)用絲素蛋白支架材料構(gòu)建組織工程化口腔黏膜固有層修復(fù)頰粘膜缺損的可行性。
　　 方法：
　　 1、采用勻漿法分離成單細(xì)胞懸液再貼壁培養(yǎng)的方法培養(yǎng)大鼠口腔黏膜成纖維細(xì)胞，傳代至第3代細(xì)胞時(shí)行波形蛋白鑒定，熒光染料染色后接種到孔徑為265μm的多孔絲素蛋白支架材料上，24小時(shí)檢測(cè)細(xì)胞粘附率；分別對(duì)培養(yǎng)1、4、7天行激光掃描共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞粘附增殖情況；4、7天行細(xì)胞支架復(fù)合物行掃描電鏡觀察。

2、r>　　 2、雄性SD清潔級(jí)大鼠48只，隨機(jī)分為3組。A組：實(shí)驗(yàn)組即口腔黏膜固有層組，n=16，以絲素蛋白支架構(gòu)建的口腔黏膜固有層修復(fù)大鼠口腔頰黏膜圓形缺損(直徑10咖)；B組：陰性對(duì)照組即絲素蛋白支架組，n=16，以絲素蛋白支架組修復(fù)大鼠口腔頰粘膜圓形缺損(直徑10mm)；C組：空白對(duì)照組，n=16，以凡士林油紗覆蓋大鼠口腔頰粘膜圓形缺損(直徑10mm)。術(shù)后7、14、21及28天分別行大體觀察、創(chuàng)面直徑測(cè)量、組織學(xué)、免疫組織化學(xué)檢

3、測(cè)。
　　 結(jié)果：
　　 1、大鼠口腔黏膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)：①光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)大多數(shù)完整、分散度好及細(xì)胞增殖快，波形蛋白檢測(cè)三代細(xì)胞時(shí)陽(yáng)性率為99％。細(xì)胞材料復(fù)合培養(yǎng)24小時(shí)后細(xì)胞粘附率為(97.76±1.34)％。②激光共聚焦顯微鏡觀察第1天細(xì)胞呈圓形或橢圓形沿著支架及孔的邊緣呈現(xiàn)散在的、單一的分布；第4天支架上細(xì)胞數(shù)量顯著增多，細(xì)胞融合、粘附。第7天支架及孔徑內(nèi)部細(xì)胞呈團(tuán)簇狀、片狀生長(zhǎng)，呈現(xiàn)長(zhǎng)梭形、橢圓形細(xì)胞覆蓋了材

4、料的大部分。⑨掃描電鏡觀察第1、4天大鼠口腔黏膜成纖維細(xì)胞呈梭形或多角形在材料上粘附伸展；第7天細(xì)胞表面有細(xì)小絨毛和褶皺形成，與接觸部位伸偽足形成，呈(鴨蹼)狀粘附和包繞纖維并可見(jiàn)細(xì)胞分泌的基質(zhì)沉積于細(xì)胞周圍和表面，細(xì)胞數(shù)量增多，細(xì)胞在支架材料上生長(zhǎng)旺盛。
　　 2、創(chuàng)面觀察：①創(chuàng)面大體觀察：術(shù)后3組創(chuàng)面直徑收縮率為C組>B組>A組，其中A組及B組創(chuàng)面呈現(xiàn)逐漸收縮，C組呈現(xiàn)先慢后快的收縮。術(shù)后7天A組及B組創(chuàng)面均被黃色薄膜覆蓋，

5、C組創(chuàng)面被淺黃色偽黏膜覆蓋。②組織學(xué)顯示：HE染色示術(shù)后C組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面炎性細(xì)胞密度及數(shù)量均大于A組及B組。③免疫組化顯示：術(shù)后7天三組新生黏膜廣譜角蛋白(cytokeration，CK)表達(dá)均陽(yáng)性。A組可見(jiàn)上皮層數(shù)明顯多于B、C兩組，C組最少，釘突粗大。A、B組新生上皮與正?？谇火つは嗨?，上皮化程度方面A組明顯優(yōu)于B組；C組口腔黏膜上皮厚薄不一，上皮下炎性細(xì)胞多。CD31染色顯示：術(shù)后A組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)新生毛細(xì)血管數(shù)量最多，且分布均