核糖體S6激酶在增生性瘢痕中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:研究核糖體S6激酶(ribosomalS6kinase，RSK)在人增生性瘢痕組織和正常皮膚組織中的表達(dá)情況及意義。探討其是否參與了增生性瘢痕纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程，以便為預(yù)防和治療增生性瘢痕提供新思路，并為該病的臨床有效治療提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1．臨床收集增生性瘢痕組織標(biāo)本14例，正常皮膚組織標(biāo)本8例，使用免疫組織化學(xué)法分別對增生性瘢痕組織和正常皮膚組織中RSK的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(Eliv

2、ison二步法)。倒置顯微鏡下觀察其在組織中的表達(dá)，隨機(jī)采取圖片，并采用Image-ProPlus6.0專業(yè)圖像分析軟件進(jìn)行分析，獨(dú)立兩樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
　　 2．臨床收集增生性瘢痕和正常皮膚組織各3例，原代細(xì)胞培養(yǎng)正常皮膚成纖維細(xì)胞和增生性瘢痕成纖維細(xì)胞，并傳代、凍存?zhèn)溆?，鏡下觀察成纖維細(xì)胞形態(tài)。
　　 3．使用MTT法檢測成纖維細(xì)胞的生長曲線，并根據(jù)酶聯(lián)免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光平均值，并作圖。

3、r>　　 4．取正常皮膚組織和增生性瘢痕組織培養(yǎng)出來的的第三代成纖維細(xì)胞，應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中的RSK的表達(dá)。倒置顯微鏡下觀察其在組織中的表達(dá)，隨機(jī)采取圖片，并采用Image-ProPlus6.0專業(yè)圖像分析軟件進(jìn)行分析，獨(dú)立兩樣本T檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)。
　　 結(jié)果:
　　 1．免疫組織化學(xué)倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)兩種組織中均有RSK蛋白的表達(dá)，分布在表皮的基底細(xì)胞內(nèi)、真皮的成纖維細(xì)胞內(nèi)和毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)。且

4、在真皮乳頭層及成纖維細(xì)胞聚集處最為明顯。結(jié)果分析顯示RSK在增生性瘢痕組織(78.39±19.12)中較正常皮膚組織(29.24±10.35)中表達(dá)高。兩種組織的表達(dá)分布存在明顯差異，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2．細(xì)胞培養(yǎng)倒置相差顯微鏡下觀察正常皮膚成纖維細(xì)胞和增生性瘢痕成纖維細(xì)胞形態(tài)相似，細(xì)胞較大，呈典型的被拉長的梭形，胞漿清晰，細(xì)胞核呈類圓形或長橢圓形，胞質(zhì)向外伸出2-3個長短不等的突起。傳代后，細(xì)胞仍保持其

5、形狀.培養(yǎng)過程中細(xì)胞生長良好。
　　 3．成纖維細(xì)胞的生長曲線測定接種后第2天開始細(xì)胞數(shù)目開始增加，進(jìn)入對數(shù)生長期，NFb倍增時間約3天，HFb倍增時間約5天，后細(xì)胞生長減緩，趨于平穩(wěn)，細(xì)胞生長曲線大致呈S形。
　　 4．成纖維細(xì)胞細(xì)胞免疫熒光化學(xué)人正常皮膚成纖維細(xì)胞和增生性瘢痕成纖維細(xì)胞胞核和胞質(zhì)中均含有RSK蛋白的表達(dá)，且細(xì)胞核中較細(xì)胞質(zhì)中顯色明顯。RSK在增生性瘢痕組織(20.38±13.44)中較正常皮膚組織(7

6、.46±2.21)中表達(dá)高。兩種組織的表達(dá)分布存在明顯差異，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1．RSK在增生性瘢痕和正常皮膚中均有表達(dá)，可能參與了細(xì)胞跨膜信號傳導(dǎo)。
　　 2．病理性瘢痕組織中RSK可能促進(jìn)了真皮層的成纖維細(xì)胞和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的過度增殖。
　　 3．RSK可能參與了增生性瘢痕纖維化的形成過程，為今后病理性瘢痕形成機(jī)制的研究提供新的思路，并為該病的臨床有效治療提供了