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文檔簡介
1、目的:通過基因工程方法構(gòu)建幽門螺桿菌黏附素( HpaA)、細(xì)胞空泡毒素(VacA)及HpaA-VacA融合蛋白作為免疫原,免疫蛋雞制備特異性卵黃抗體(IgY),并研究其生物活性,為Hp感染的治療與預(yù)防開辟了一條新路徑,同時(shí)也為制備抗Hp感染的制劑奠定基礎(chǔ)。
方法與結(jié)果:1.采用PCR方法分別克隆幽門螺桿菌HpaA、VacA及HpaA-VacA融合基因??寺≥d體酶切和測序結(jié)果均顯示,Hp HpaA、VacA和HpaA-VacA融
2、合基因成功克隆到pGEM-3Z質(zhì)粒中。2.通過DNA重組技術(shù)分別構(gòu)建Hp HpaA、VacA和HpaA-VacA融合基因的原核表達(dá)系統(tǒng)。SDS-PAGE結(jié)果表明,以上原核表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建成功,且HpaA、VacA和HpaA-VacA融合蛋白均高效表達(dá)。3.通過親和層析法純化HpaA、VacA及HpaA-VacA融合蛋白,SDS-PAGE分析其純度,Western blot鑒定其免疫學(xué)活性。結(jié)果顯示,純化后的三種重組蛋白純度均達(dá)到90%以上,
3、且均能夠被Hp感染病人的血清所識別,即三種融合蛋白都具有良好的免疫學(xué)活性。4.以純化的HpaA、VacA及HpaA-VacA融合蛋白分別免疫蛋雞,分離提純IgY,鑒定其生物學(xué)活性。SDS-PAGE測定IgY純度均為85%左右;Western blot顯示IgY都具有良好的免疫特異性即能與相應(yīng)的抗原發(fā)生特異性結(jié)合;間接ELISA結(jié)果顯示,HpaA-IgY效價(jià)為1:12800;VacA-IgY效價(jià)為1:12800;HpaA-VacA-IgY
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