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1、目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立高脂STZ誘導(dǎo)并卵巢切除大鼠股骨骨折模型,研究2型糖尿病合并雌激素缺乏對(duì)骨折愈合的影響。
方法:2月齡健康雌性SPF級(jí)Sprague Dawley(SD)大鼠40只,適應(yīng)性飼養(yǎng)1w后,隨機(jī)分為四組(每組10只):1)骨折對(duì)照組(Sham+F組):普通飲食,第3w時(shí)腹腔內(nèi)注射檸檬酸緩沖液,第4w時(shí)暴露腹腔,但不切除卵巢,第10w時(shí)行右側(cè)股骨骨折手術(shù);2)高脂STZ+骨折組(HFD/STZ+F組):高脂飲食,第
2、3w時(shí)腹腔內(nèi)注射STZ溶液,第4w時(shí)暴露腹腔,但不切除卵巢,第10w時(shí)行右側(cè)股骨骨折手術(shù);3)卵巢切除+骨折組(OVX+F組):普通飲食,第3w時(shí)腹腔注射檸檬酸緩沖液,第4w時(shí)行雙側(cè)卵巢切除,第10w時(shí)行右側(cè)股骨骨折手術(shù);4)高脂STZ+卵巢切除+骨折組(HFD/STZ+OVX+F組):高脂飲食,第3w時(shí)腹腔內(nèi)注射STZ溶液,第4w時(shí)行雙側(cè)卵巢切除,第10w時(shí)行右側(cè)股骨骨折手術(shù)。HFD/STZ+F與HFD/STZ+OVX+F組大鼠造模1
3、w后尾靜脈采血測(cè)隨機(jī)血糖,血糖≥16.7mmol/L則為造模成功,定期監(jiān)測(cè)各組大鼠體重、隨機(jī)血糖;卵巢切除術(shù)、骨折手術(shù)術(shù)前30min、術(shù)后連續(xù)2d肌肉注射青霉素預(yù)防感染。各組大鼠骨折術(shù)后即時(shí)及3w后行X線攝影檢查骨折及骨折愈合情況,并進(jìn)行影像學(xué)評(píng)分;之后處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。股骨樣本脫鈣12w,石蠟包埋切片,行番紅-O-固綠染色及組織學(xué)評(píng)級(jí), COL-I免疫組化染色,免疫組化陽(yáng)性蛋白表達(dá)行IRS評(píng)分。數(shù)據(jù)資料應(yīng)用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分
4、析。
結(jié)果:1、體重結(jié)果:第8w時(shí), HFD/STZ+F組體重顯著低于 Sham+F組(P<0.05),OVX+F組體重顯著高于Sham+F組(P<0.05);HFD/STZ+F組與HFD/STZ+OVX+F組體重顯著低于OVX+F組(P<0.05);HFD/STZ+OVX+F組體重顯著高于HFD/STZ+F組(P<0.05);第12w時(shí),OVX+F組體重顯著高于Sham+F組(P<0.05), HFD/STZ+F組與HFD/
5、STZ+OVX+F組體重均顯著低于Sham+F組與OVX+F組(P<0.05)。2、血糖結(jié)果:第4、8、12周時(shí),HFD/STZ+F組與 HFD/STZ+OVX+F組隨機(jī)血糖均顯著高于 Sham+F組與 OVX+F組(P<0.05)。3、影像學(xué) X線結(jié)果:1)骨折愈合評(píng)分結(jié)果, HFD/STZ+F組(1.44±0.52)、OVX+F組(1.64±0.20)與HFD/STZ+OVX+F組(1.22±0.44)均顯著低于Sham+F組(2.
6、49±0.53)(P<0.05),骨折愈合較差;2)骨痂面積結(jié)果,HFD/STZ+F組(1058.63±301.14)與HFD/STZ+OVX+F組(1375.13±390.60)均顯著高于 OVX+F組(690.38±288.12)與 Sham+F組(611.25±57.53)(P<0.05),且HFD/STZ+OVX+F組(1375.13±390.60)顯著高于HFD/STZ+F組(1058.63±301.14)(P<0.05)。4
7、組織形態(tài)學(xué)結(jié)果:1)番紅-O-染色,骨折愈合率HFD/STZ+F組(12.5%)、OVX+F組(20%)與HFD/STZ+OVX+F組(0)顯著低于 Sham+F組(70%)(P<0.05),骨折愈合較差;2)免疫組化結(jié)果, HFD/STZ+F組、OVX+F組與HFD/STZ+OVX+F組Col-1陽(yáng)性表達(dá)IRS評(píng)分顯著低于Sham+F(P<0.05),骨折愈合較差。
結(jié)論:1、高脂STZ誘導(dǎo)延遲了大鼠股骨骨折愈合進(jìn)程,提示2
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