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文檔簡介
1、該實驗通過研究CTGF反義寡核苷酸對TGF-β<,1>誘導的TEMT及細胞外基質(zhì)膠原Ⅲ的影響,反證TGF-β-CTGF的致TEMT及纖維化作用,并通過CTGF反義寡核苷酸對CTGF的特異性阻斷作用,為RIF的防治提供新的方法.方法:將體外培養(yǎng)的正常大鼠腎小管上皮細胞(NRK52E)分為空白組、TGF-β<,1>組、空脂質(zhì)體組、反義對照組和反義組,每組設三復孔.經(jīng)脂質(zhì)體介導基因轉(zhuǎn)染后,加TGF-β<,1>刺激48h.以RT-PCR檢測CT
2、GF反義寡核苷酸對CTGF的阻斷作用,以RT-PCR、流式細胞儀和免疫組織化學方法定量及定性檢測肌纖維母細胞特異性標志物α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA),倒置相差顯微鏡、掃描電鏡觀察細胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu),應用ELISA法分析測定培養(yǎng)細胞上清液膠原Ⅲ的含量.結(jié)論:1反義寡核苷酸的阻斷作用反向證明,CTGF能誘導腎小管上皮細胞發(fā)生肌成纖維細胞轉(zhuǎn)分化,促進細胞外基質(zhì)膠原Ⅲ的合成,且這種作用是TGF-β的下游效應.2 CTGF反義寡核苷酸能夠抑制
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