7個豬胎盤通透性相關基因的分離、定位、表達分析及其多態(tài)檢測.pdf

1、豬胎兒的發(fā)育依賴于母體營養(yǎng)供給，母體和胎兒之間的物質(zhì)運輸是通過胎盤進行的。影響母體和胎兒之間物質(zhì)運輸?shù)囊蛩刂饕刑ケP表面血管的密度和通透性以及胎盤面積。胎盤表面血管的生長及其調(diào)控與多種細胞因子有關。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是一個主要的促進血管生長、舒張和增加血管通透性的調(diào)節(jié)子。VEGF基因的表達增加能夠激活其酪氨酸激酶受體VEGFR1和VEGFR2，誘導VEGFR信號轉(zhuǎn)導通路的下游目標基因內(nèi)皮一氧化氮合酶(eNOS)和血管內(nèi)皮鈣粘蛋

2、白(CDH5)活性，促進血管內(nèi)皮細胞的增殖和增加血管通透性。本研究以人、鼠和牛的VEGF，VEGFR1，VEGFR2，eNOS，iNOS，ARRB2，CDH5基因為基礎，通過比較基因組學和生物信息學等方法克隆了豬VEGF，VEGFR1，VEGFR2，eNOS，iNOS，ARRB2，CDH5基因的部分cDNA序列；采用RT-PCR和熒光定量PCR方法研究了這7個基因的組織表達和時空表達規(guī)律；并且以大白豬為研究對象，采用測序和PCR-RFL

3、P等方法檢測iNOS基因的多態(tài)性及其與生產(chǎn)和繁殖性狀的關系。主要研究結果如下：
　　 1.采用同源克隆和電子克隆相結合的方法克隆了豬VEGF，VEGFR1，VEGFR2，eNOS，iNOS，ARRB2，CDH5基因部分cDNA序列，提交NCBI獲得收錄號EU714324，EU714325，EU714326，EU714327，EU274294，EU714330，EU714329，推導出的氨基酸序列與來自EMBL和GenBank數(shù)據(jù)

4、庫的其他物種蛋白序列進行比對，并用DNAMAN軟件對VEGF，VEGFR1，VEGFR2，eNOS，iNOS，ARRB2，CDH5基因作了進化樹分析。
　　 2.根據(jù)基因內(nèi)含子區(qū)域設引物后利用輻射雜種板技術對VEGF，VEGFR1和VEGFR2基因進行了染色體定位，結果表明它們分別定位在7q11-q12、11p13以及8p12區(qū)域。上述3個基因的定位結果皆與人基因組中相應基因的染色體位置相對應。
　　 3.利用RT-PC

5、R方法檢測了VEGF，VEGFR1，VEGFR2，eNOS，iNOS，ARRB2，CDH5基因在長白豬90d胚胎的心、肝、脾、肺、腎、肌肉、胎盤七個組織的表達水平，結果表明VEGF，VEGFR1，VEGFR2，eNOS，iNOS，ARRB2，CDH5基因在長白豬90d胚胎的心、肝、脾、肺、腎、肌肉、胎盤七個組織中均廣泛表達。
　　 4.利用實時熒光定量PCR方法檢測了VEGF，VEGFR1，VEGFR2，eNOS，iNOS、CD

6、H5和ARRB2基因在不同妊娠時期和不同品種豬胎盤中的表達水平差異。結果表明VEGF和ARRB2基因在長白豬妊娠33d到90d胎盤表達趨勢上調(diào)(p<0.05)；VEOF，VEGFR1，VEGFR2和eNOS基因在二花臉妊娠90d胎盤中表達水平與在長白豬妊娠90d胎盤的表達相比均顯著升高(p<0.01)，CDH5和ARRB2基因表達水平在二花臉妊娠90d胎盤中與在長白豬妊娠90d胎盤的表達相比顯著降低(p<0.01)。
　　 5.