養(yǎng)精膠囊通過Nur77調(diào)節(jié)Leydig細胞睪酮合成及其機制研究.pdf

1、目的:研究養(yǎng)精膠囊促進Leydig細胞睪酮合成的分子機制。
　　方法:1周齡、4周齡、12周齡、12月齡雄性小鼠各6只，分別為幼年期組、性發(fā)育前組、性成熟期組及老年組。飼養(yǎng)三天，適應(yīng)環(huán)境后，各組小鼠全部脫頸處死，取雙側(cè)新鮮睪丸組織，采用Real-time PCR法檢測Nur77 mRNA的表達，Western blot法檢測Nur77蛋白的表達。以體外培養(yǎng)的小鼠MLTC-1細胞為模型，不加或者加入養(yǎng)精膠囊提取液(0.01～1 mg

2、/mL)作用后，用Real-Time PCR和Western Blot法檢測Nur77的mRNA和蛋白質(zhì)的表達;用熒光素酶報告基因法檢測Nur77基因的啟動子活性;利用Nur77干擾腺病毒(Ad-siNur77)和空載腺病毒(Ad-CMV)轉(zhuǎn)染MLTC-1，通過放射免疫法檢測MLTC-1細胞培養(yǎng)液上清的睪酮含量;Real-Time PCR和Western Blot法檢測StAR及HSD3B的mRNA和蛋白質(zhì)的表達。
　　結(jié)果:幼年

3、期組、性發(fā)育前組、性成熟期組、老年組小鼠睪丸組織中Nur77 mRNA相對表達量以性發(fā)育前組最高，與余3組相比，有統(tǒng)計學(xué)差異;Nur77蛋白相對表達量以性成熟期組最高，與余3組相比，有統(tǒng)計學(xué)差異;干涉MLTC-1細胞Nur77基因表達后，MLTC-1細胞基礎(chǔ)水平的睪酮合成、StAR和HSD3B的表達均明顯下降;養(yǎng)精膠囊提取液作用于體外培養(yǎng)MLTC-1細胞后，Nur77的mRNA和蛋白質(zhì)表達水平均呈現(xiàn)出劑量與時間依賴性的變化;Nur77基