血清髓過氧化物酶檢測方法的建立及其在冠心病危險分層及預(yù)測急性冠脈事件的應(yīng)用研究.pdf

1、背景：
　　臨床和流行病學(xué)研究顯示低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平增高等代謝紊亂與冠心病(CHD)急性冠脈事件緊密相關(guān)。由于對于動脈粥樣硬化為一慢性炎性病變的認(rèn)識已獲公認(rèn)，因此有關(guān)動脈粥樣硬化和CHD相關(guān)炎性外顯因素的研究成為熱點。新近研究發(fā)現(xiàn)，血清髓過氧化物酶(MPO)對冠狀動脈血管壁粥樣硬化病變有廣泛的影響，其表達(dá)和濃度升高促進(jìn)CHD發(fā)生和發(fā)展，是一種新的預(yù)測急性冠脈綜合征(ACS)的炎性標(biāo)志物。目前，國內(nèi)外檢測血清MPO

2、水平多采用ELISA法和選擇抑制法，但均因其影響因素多、精密度差、操作繁瑣而使其在臨床上的普遍應(yīng)用受到限制。
　　目的：
　　本研究擬建立一種基于抗原-抗體特異性反應(yīng)原理的快速定量檢測血清MPO水平的新方法--顆粒增強(qiáng)透射免疫分析法；探索血清MPO與白細(xì)胞介素-6(IL-6)、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)聯(lián)合檢測對CHD危險分層的價值；探討CHD患者M(jìn)PO與ACS，LDL-C等代謝紊亂相關(guān)參數(shù)，炎性標(biāo)志物，CHD傳統(tǒng)危險因

3、素及生活習(xí)性的可能聯(lián)系；前瞻性追蹤研究穩(wěn)定性心絞痛(SAP)患者血清MPO基線水平與ACS事件的相關(guān)性。
　　方法：
　　①用MPO抗體包被乳膠顆粒建立MPO顆粒增強(qiáng)透射免疫分析法，按美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)文件，對該法進(jìn)行方法學(xué)性能評價。
　?、跈z測CHD組[急性心肌梗死(AMI)、不穩(wěn)定性心絞痛(UAP)、SAP患者]和對照組[非冠心病疾病組(NCHD)和健康體檢者]血清MPO、IL-6和hs-CRP

4、水平。用矩陣決策法評估其對ACS的診斷效率。
　?、塾肔ogistic回歸分析血清MPO水平與ACS，代謝紊亂相關(guān)參數(shù)[LDL-C、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、總膽固醇(TC)、三?；视?TG)、同型關(guān)胱氨酸(Hcy)、空腹血糖(FBG)、胰島素(INS)]，炎性標(biāo)志物(IL-6、hs-CRP)、其他CHD傳統(tǒng)危險因素及生活習(xí)性[體質(zhì)指數(shù)(BMI)、糖尿病、高血壓、性別、年齡、吸煙、飲酒]的相互聯(lián)系。
　　④前瞻性追

5、蹤觀察146例SAP患者急性冠脈事件發(fā)生情況，比較MPO基線水平增高組與正常-低組ACS發(fā)生率差異。
　　結(jié)果：
　?、僮匝薪⒌臏y定血清MPO顆粒增強(qiáng)透射免疫分析法。該法準(zhǔn)確度好，相對偏差≤9.95％；精密度高，批內(nèi)CV≤1.92％，批間CV≤3.00％；線性范圍寬，為0 ng/mL～1300 ng/mL；靈敏度高，最低檢測限為5 ng/mL：抗干擾能力強(qiáng)，膽紅素≤513μmol/L、抗壞血酸≤0.40g/L、三酰基甘油≤

6、11.3 mmol/L對其結(jié)果無影響。與ELISA法及選擇抑制法比對，相關(guān)性良好，R2分別為0.9865和0.9867。
　?、贏CS組MPO明顯比SAP組、NCHD組及健康組高(P<0.001)。串聯(lián)分析3種炎性標(biāo)志物(MPO、IL-6和hs-CRP)診斷ACS的靈敏度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值和準(zhǔn)確度分別為74.53％、79.82％、89.64％、57.23％和76.12％。
　?、垩錗PO濃度與LDL-C、TC

7、、TG、Hcy、FBG、IL-6、hs-CRP、收縮壓、舒張壓、年齡及體質(zhì)指數(shù)呈正相關(guān)，與HDL-C呈負(fù)相關(guān)。MPO受試者工作特征曲線(ROC)下的面積(Az)為0.84(95％CI：0.80-0.88，P<0.001)，MPO最佳cut-off值取164.77 ng/mL時，其診斷ACS的靈敏度和特異性分別為79.1％和82.1％。逐步多元Logistic回歸分析顯示，在剔除TG、Hcy、UA、FBG、INS、IL-6、SBP、DBP

8、、性別、酗酒等混雜因素后，LDL-C、HDL-C、TC、hs-CRP、age、BMI、ACS、吸煙是與高M(jìn)PO水平相關(guān)的獨立變量。
　　LDL-C最高三分位數(shù)與最低三分位數(shù)相比，發(fā)生高M(jìn)PO的比值比(OR)為3.24(95％CI：1.67-6.29，P=0.001)；HDL-C最高三分位數(shù)與最低三分位數(shù)相比，發(fā)生高M(jìn)PO的OR為0.19(95％CI：0.11-0.34，P<0.001)；TC最高三分位數(shù)與最低三分位數(shù)相比，發(fā)生高M(jìn)

9、PO的OR為2.94(95％CI：1.55-5.58，P=0.001)；hs-CRP最高三分位數(shù)與最低三分位數(shù)相比，發(fā)生高M(jìn)PO的OR為2.30(95％CI：1.32-3.99，P=0.003)；年齡最高三分位數(shù)與最低三分位數(shù)相比，發(fā)生高M(jìn)PO的OR為2.37(95％CI：1.36-4.13，P=0.002)；體質(zhì)指數(shù)最高三分位數(shù)與最低三分位數(shù)相比，發(fā)生高M(jìn)PO的OR為2.03(95％CI：1.17-3.54，P=0.012)；ACS組

10、高M(jìn)PO發(fā)生率是非ACS組的2.74倍(95％CI：1.71-4.39，P<0.001)；吸煙組高M(jìn)PO發(fā)生率為非吸煙組的2.62倍(95％CI：1.62-4.25，P<0.001)。其中LDL-C(ⅢvsⅠ tertile)和ACS(yes vsno)分別在定量變量和定性變量中的比值比最高。MPO從最低三分位數(shù)到最高三分位數(shù)，其ACS和高LDL-C患病率均逐漸增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)，分別從最低(第一)三分位數(shù)的46.

11、4％和8.9％，增加到中間(第二)三分位數(shù)的68.O％和31.5％，到最高(第三)三分位數(shù)的88.8％和59.8％。
　?、軐?46例年齡38～84歲的SAP患者隨訪6個月研究發(fā)現(xiàn)，MPO基線水平增高組ACS發(fā)生率為28.9％(11/43)，明顯比MPO基線水平正常-低組ACS發(fā)生率8.3％(9/103)高(X2=10.10，P=0.001)。
　　結(jié)論：
　?、僮匝薪⒌臏y定血清MPO顆粒增強(qiáng)透射免疫分析法。該法靈敏

12、度和特異性高，準(zhǔn)確性好，線性范圍寬，抗干擾力強(qiáng)，操作簡易，與ELISA法及選擇抑制法相關(guān)良好，適合在自動生化分析儀上使用。
　?、诼?lián)合檢測MPO、IL-6和hs-CRP可鑒別診斷CHD不同病理階段，提高對ACS診斷的特異性和陽性預(yù)測值，有助于CHD的危險分層。
　?、郾狙芯刻峁┝艘韵屡R床流行病學(xué)證據(jù)：增加的血清MPO水平與ACS和高LDL-C水平緊密相聯(lián)；MPO與LDL-C交互影響促進(jìn)CHD患者動脈粥樣硬化病變的發(fā)生和發(fā)展，