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文檔簡介
1、生脈方在臨床上多用于治療慢性心力衰竭、心律失常等心血管疾病。S型人參皂苷Rg3作為生脈方的活性化合物之一,其心肌保護(hù)機(jī)制尚有待深入研究。本論文應(yīng)用miRNA組學(xué)技術(shù)研究生脈方及S型人參皂苷Rg3抗慢性心衰作用,在大鼠慢性心衰模型上發(fā)現(xiàn)生脈方和S型人參皂苷Rg3調(diào)控的差異miRNA,推測其作用靶點(diǎn)與潛在作用途徑,在細(xì)胞模型上驗(yàn)證生脈方和S型人參皂苷Rg3的心肌保護(hù)作用,為闡釋生脈方及其藥效物質(zhì)的作用機(jī)制提供依據(jù)。
主要研究成果如
2、下:
1、采用miRNA芯片技術(shù)研究生脈方對(duì)慢性心衰大鼠心肌miRNA表達(dá)的影響,發(fā)現(xiàn)與模型組相比有16個(gè)差異miRNA,其中10個(gè)表達(dá)上調(diào),6個(gè)表達(dá)下調(diào)。差異miRNA中包括與心肌肥大相關(guān)的miR-21-3p,與缺氧損傷相關(guān)的miR-294,與凋亡相關(guān)的miR-542-3p,采用RT-PCR技術(shù)對(duì)這些miRNA進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。構(gòu)建了差異miRNA的靶基因網(wǎng)絡(luò)圖,找出生脈方可能影響的信號(hào)通路與潛在的作用途徑,并在細(xì)胞水平上驗(yàn)證
3、了生脈方具有抗心肌細(xì)胞肥大和抗心肌細(xì)胞凋亡的作用。
2、采用miRNA芯片技術(shù)研究生脈方中的活性物質(zhì)S型人參皂苷Rg3對(duì)心衰大鼠缺血心肌miRNA表達(dá)的影響,發(fā)現(xiàn)與模型組相比有14個(gè)差異miRNA,其中8個(gè)表達(dá)上調(diào),6個(gè)表達(dá)下調(diào)。發(fā)現(xiàn)差異miRNA中有參與SIRT1調(diào)控的miR-200-5p,預(yù)測相關(guān)的靶基因及可能影響的通路,并以SIRT1為靶點(diǎn)進(jìn)行深入研究。應(yīng)用SIRT1活性檢測熒光探針篩選生脈方中的活性化合物,發(fā)現(xiàn)12個(gè)具
4、有SIRT1激動(dòng)活性的化合物,其中7個(gè)來自人參,2個(gè)來自麥冬,3個(gè)來自五味子。研究人參皂苷類SIRT1激動(dòng)劑的結(jié)構(gòu)規(guī)律,發(fā)現(xiàn)母核為原人參二醇的人參皂苷類化合物具有較強(qiáng)的SIRT1激動(dòng)活性,特別是人參皂苷20號(hào)碳的S構(gòu)型對(duì)激動(dòng)SIRT1起關(guān)鍵作用。以S型人參皂苷Rg3為代表性化合物,運(yùn)用分子對(duì)接技術(shù)發(fā)現(xiàn)S型人參皂苷Rg3在底物多肽與SIRT1結(jié)合過程中起橋梁作用,從而增強(qiáng)蛋白與底物的結(jié)合能力。應(yīng)用液相質(zhì)譜聯(lián)用、表面等離子共振等技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)
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