骨痹舒片對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎組織形態(tài)、氧自由基及Coll-Ⅱ、MMP-1、MMP-13影響的研究.pdf

1、目的:1.觀察骨痹舒片對(duì)實(shí)驗(yàn)性膝骨關(guān)節(jié)炎組織形態(tài)的影響及對(duì)氧自由基的調(diào)節(jié);2.觀察骨痹舒片含藥血清對(duì)兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的增殖及IL-1β作用下體外培養(yǎng)的兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞Coll-Ⅱ、MMP-1、MMP-13mRNA及蛋白表達(dá)的影響;3.從組織、細(xì)胞、蛋白、基因多水平探討骨痹舒片防治OA的作用機(jī)制。
　　 方法:1.SD大鼠40只,采用改良Hulth法復(fù)制膝骨性關(guān)節(jié)炎模型,隨機(jī)分為空白組、模型組、骨痹舒片組、抗骨增生膠囊組,每組10只。

2、每日灌胃1次,連續(xù)6周。6周后取股骨內(nèi)髁關(guān)節(jié)軟骨,經(jīng)HE、Masson、Safranin-O染色,光鏡觀察并行Mankin's評(píng)分;測(cè)血清SOD、MDA、NO含量;2.獲取1月齡兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,隨機(jī)分為空白組(正常兔血清)及骨痹舒片含藥血清組,每組再分5％、10％、15％、20％4個(gè)濃度,共8組。分別于培養(yǎng)第1d、3d、5d、7d、9d用MTT法檢測(cè)軟骨細(xì)胞的增殖情況;3.獲取1月齡兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,取第Ⅰ代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為空白組,

3、模型組、骨痹舒片組、抗骨增生膠囊組4組,培養(yǎng)第4天時(shí),模型組、骨痹舒片組及抗骨增生膠囊組分別加入IL-1β10ng/ml繼續(xù)培養(yǎng),分別在培養(yǎng)后24h、48h、72h用RT-PCR檢測(cè)各指標(biāo)mRNA表達(dá)情況;4.獲取1月齡兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,取第Ⅰ代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為空自組,模型組、骨痹舒片組、抗骨增生膠囊組4組,培養(yǎng)第4天時(shí),模型組、骨痹舒片組及抗骨增牛膠囊組分別加入IL-1β10ng/ml繼續(xù)培養(yǎng),分別在培養(yǎng)后24h、48h、72h用

4、In-CellWestern法檢測(cè)各蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:1.Mankin's評(píng)分:模型組10.13±2.357,骨痹舒片組6.75±1.753,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);血清SOD、MDA、NO含量模型組分別為:21.315±8.633,12.619±1.51,70.125±3.786;骨痹舒片組為:50.761±7.428,6.853±5.053,54.171±4.125,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05

5、);2.骨痹舒片含藥血清組細(xì)胞呈血清濃度依賴性增殖。同一時(shí)間點(diǎn)各組間比較差異均有顯著性(P＜0.05),以20％組最佳;空白血清組中5％組、10％組與20％組相比在各時(shí)間點(diǎn)相比均有顯著性差異(P＜0.05),15％組與20％組相比在第1、3、5、7d各時(shí)間點(diǎn)相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05),在第9d時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05),以20％組最佳。20％骨痹舒片含藥血清組與20％空白血清組相比,在第1d、3d、5d、7d時(shí)有顯著性差異(P

6、＜0.05),第9d差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);3.各時(shí)間點(diǎn)空白組與模型組Coll-Ⅱ、MMP-1及MMP-13表達(dá)差異均有顯著性(P＜0.05),骨痹舒片組較模型組Coll-Ⅱ表達(dá)在48h、72h時(shí)間點(diǎn)有顯著性差異(P＜0.05),骨痹舒片組較模型組MMP-1及MMP-13表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均有顯著性差異(P＜0.05);4.與模型組比,骨痹舒片組Coll-ⅡmRNA表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均顯著上調(diào),MMP-1、MMP-13mRNA表達(dá)在各

7、時(shí)間點(diǎn)均顯著下調(diào)。
　　 結(jié)論:1.骨痹舒片可通過提高SOD活性、有效清除氧自由基,抑制NO的過量釋放及生物學(xué)效應(yīng),發(fā)揮減輕軟骨破壞,延緩關(guān)節(jié)軟骨退變的作用;2.20％的骨痹舒片含藥血清能顯著促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖,并將細(xì)胞的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)提前至第3d;3.骨痹舒片能上調(diào)IL-1β作用下Coll-ⅡmRNA的表達(dá),下調(diào)IL-1β誘導(dǎo)和激活的MMP-1、MMP-13mRNA的表達(dá);4.骨痹舒片能有效抑制IL-1β對(duì)Coll-Ⅱ的降解和破壞作