連翹酯苷對(duì)膿毒癥大鼠血清細(xì)胞因子水平和組織CD88mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　探索連翹酯苷下調(diào)膿毒癥血清細(xì)胞因子水平及抑制膿毒癥大鼠血清補(bǔ)體C5a及其受體CD88上調(diào)的潛在免疫學(xué)機(jī)制，為基于特定免疫機(jī)制的連翹酯苷靶向治療膿毒癥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　采用盲腸結(jié)扎穿孔法(CLP)制備大鼠膿毒癥模型。選擇雄性Wistar大鼠210只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組：正常組(n=15)、假手術(shù)組(n=15)、治療組(n=90)、模型組(n=90)。治療組根據(jù)不同時(shí)間點(diǎn)(24h、48 h及7

2、2h)隨機(jī)分為3個(gè)亞組(n=30)，模型組同理隨機(jī)分為3個(gè)亞組(n=30)。治療組分別于CLP術(shù)后0、12、24、48、60 h依次尾靜脈注射連翹酯苷注射液，每次注射劑量為0.5 ml；模型組、正常組及假手術(shù)組同理給予等量生理鹽水尾靜脈注射。術(shù)后根據(jù)不同時(shí)間點(diǎn)腹主動(dòng)脈采血并取大鼠肺、肝、腎組織。大鼠動(dòng)脈血離心取血清，采用ELISA法檢測(cè)膿毒癥大鼠血清中細(xì)胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、MIF、HMGB1)的水平。qPCR法檢測(cè)

3、膿毒癥大鼠肺、肝、腎組織CD88mRNA的表達(dá)。HE染色觀察膿毒癥大鼠肺、肝、腎組織的組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。免疫組織化學(xué)法觀察膿毒癥大鼠肺、肝、腎組織C5aR（CD88）的表達(dá)。并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：
　　1、ELISA法測(cè)定膿毒癥大鼠血清 TNF-α水平：治療組24h與模型組24h比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.017）。血清IL-1β水平：治療組24h與模型組24h比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.000）。血清IL-6水平：治療

4、組與模型組各時(shí)間段比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。血清MIF水平：治療組與模型組各時(shí)間段比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。血清HMGB1水平：治療組與模型組各時(shí)間段比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2、qPCR法測(cè)定膿毒癥大鼠肺、肝、腎組織CD88mRNA的表達(dá)：膿毒癥大鼠肺組織中，治療組72h與模型組72hCD88mRNA表達(dá)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.036），治療組48h與模型組48hCD88mRNA表達(dá)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.010），治療組24h與模型組

5、24hCD88mRNA表達(dá)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。膿毒癥大鼠肝組織中，治療組與模型組各時(shí)間段 CD88mRNA的表達(dá)比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。膿毒癥大鼠腎組織中，治療組與模型組各時(shí)間段CD88mRNA表達(dá)比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3、HE染色觀察膿毒癥大鼠肺、肝、腎組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)大致正常，無(wú)細(xì)胞水腫及壞死。
　　4、免疫組織化學(xué)法觀察到CD88蛋白主要定位于細(xì)胞胞膜,胞漿部分染色,呈棕黃色或棕褐色,染色均一,在實(shí)驗(yàn)各組中各時(shí)間段肝、腎組織