連翹酯苷對膿毒癥大鼠血清細胞因子水平和組織CD88mRNA表達的影響.pdf

1、目的：
　　探索連翹酯苷下調膿毒癥血清細胞因子水平及抑制膿毒癥大鼠血清補體C5a及其受體CD88上調的潛在免疫學機制，為基于特定免疫機制的連翹酯苷靶向治療膿毒癥提供實驗依據。
　　方法：
　　采用盲腸結扎穿孔法(CLP)制備大鼠膿毒癥模型。選擇雄性Wistar大鼠210只，按隨機數字表法分為3組：正常組(n=15)、假手術組(n=15)、治療組(n=90)、模型組(n=90)。治療組根據不同時間點(24h、48 h及7

2、2h)隨機分為3個亞組(n=30)，模型組同理隨機分為3個亞組(n=30)。治療組分別于CLP術后0、12、24、48、60 h依次尾靜脈注射連翹酯苷注射液，每次注射劑量為0.5 ml；模型組、正常組及假手術組同理給予等量生理鹽水尾靜脈注射。術后根據不同時間點腹主動脈采血并取大鼠肺、肝、腎組織。大鼠動脈血離心取血清，采用ELISA法檢測膿毒癥大鼠血清中細胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、MIF、HMGB1)的水平。qPCR法檢測

3、膿毒癥大鼠肺、肝、腎組織CD88mRNA的表達。HE染色觀察膿毒癥大鼠肺、肝、腎組織的組織細胞形態(tài)學改變。免疫組織化學法觀察膿毒癥大鼠肺、肝、腎組織C5aR（CD88）的表達。并進行統(tǒng)計分析。
　　結果：
　　1、ELISA法測定膿毒癥大鼠血清 TNF-α水平：治療組24h與模型組24h比較有統(tǒng)計學差異（P=0.017）。血清IL-1β水平：治療組24h與模型組24h比較有統(tǒng)計學差異（P=0.000）。血清IL-6水平：治療

4、組與模型組各時間段比較均無統(tǒng)計學差異。血清MIF水平：治療組與模型組各時間段比較均無統(tǒng)計學差異。血清HMGB1水平：治療組與模型組各時間段比較均無統(tǒng)計學差異。
　　2、qPCR法測定膿毒癥大鼠肺、肝、腎組織CD88mRNA的表達：膿毒癥大鼠肺組織中，治療組72h與模型組72hCD88mRNA表達比較有統(tǒng)計學差異（P=0.036），治療組48h與模型組48hCD88mRNA表達比較有統(tǒng)計學差異（P=0.010），治療組24h與模型組

5、24hCD88mRNA表達比較無統(tǒng)計學差異。膿毒癥大鼠肝組織中，治療組與模型組各時間段 CD88mRNA的表達比較均無統(tǒng)計學差異。膿毒癥大鼠腎組織中，治療組與模型組各時間段CD88mRNA表達比較均無統(tǒng)計學差異。
　　3、HE染色觀察膿毒癥大鼠肺、肝、腎組織細胞結構大致正常，無細胞水腫及壞死。
　　4、免疫組織化學法觀察到CD88蛋白主要定位于細胞胞膜,胞漿部分染色,呈棕黃色或棕褐色,染色均一,在實驗各組中各時間段肝、腎組織