小鼠顆粒細胞中STAT1調控Cyp1b1表達機制的研究.pdf

1、雌二醇(Estradiol，E2)在卵巢中具有促進顆粒細胞增殖及調節(jié)卵母細胞分化等作用，是卵泡生長發(fā)育和顆粒細胞存活的重要因子。卵泡內雌激素的產生能力與代謝水平對于卵泡健康非常重要，充足的雌激素對于卵泡的發(fā)育和排卵是必不可少的。Cyp1b1是Cytochrome P4501亞家族的成員之一，在機體組織內主要負責鹵代及多環(huán)芳烴的代謝。在小鼠卵泡內，Cyp1b1能將雌二醇代謝成4-羥基雌二醇，降低卵泡內雌激素的含量，且代謝產物4-羥基雌二醇

2、能引起卵泡顆粒細胞的凋亡。因此，研究Cyp1b1的調控表達機制對解釋卵泡發(fā)育障礙的分子機理具有重要意義。調控Cyp1b1表達的轉錄因子有很多，在實驗室前期研究基礎上，本文挑選STAT1作為Cyp1b1的候選轉錄因子，研究在小鼠顆粒細胞中其調控Cyp1b1表達的機制。相關研究內容與結論如下:
　　(1)構建小鼠STAT1過表達載體并將其轉染到小鼠顆粒細胞中，觀察其本身的表達情況及其對Cyp1b1表達的影響。結果表明:STAT1過表達

3、載體能在小鼠顆粒細胞內高效表達，且能促進Cyp1b1 mRNA轉錄及蛋白的表達。說明STAT1確實調控Cyp1b1的表達。
　　(2)網站預測（http://www.cbrc.jp/research/db/ TFSEARCH.html）發(fā)現，STAT1在Cyp1b1的啟動子區(qū)域有兩個綁定位點(binding site，BS)，分別位于轉錄起始位點的上游-908到-900區(qū)域(BS1)和下游的+486到+494區(qū)域(BS2)。構建野

4、生型及綁定位點突變型Cyp1b1啟動子區(qū)域（-1208到+818）熒光素酶報告質粒，將這些載體與STAT1過表達載體共同轉染到3T3細胞內，比較不同轉染組熒光素酶活性發(fā)現，與野生型相比，綁定位點突變后能顯著降低相關載體的熒光素酶活性。說明網站預測的結合位點是正確的，STAT1直接與Cyp1b1啟動子區(qū)域結合調控Cyp1b1的表達。
　　(3)只將綁定位點突變型Cypb1啟動子區(qū)域熒光素酶報告質粒與STAT1過表達載體共同轉染到3T