補(bǔ)腎對超排卵周期顆粒細(xì)胞GDNF、GFR_α-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察補(bǔ)腎中藥對超排卵周期顆粒細(xì)胞膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(glial cellline-derived neurotrophic factor,GDNF)、GDNF家族特異性受體α-1(GDNF familyreceptorα-1,GFRα-1)的影響,從卵母細(xì)胞生殖泡裂解、第一極體的排出及其成熟旁分泌調(diào)節(jié)的角度,探討補(bǔ)腎改善卵母細(xì)胞質(zhì)量,提高控制性超排卵妊娠結(jié)局的機(jī)制。方法:臨床研究:將80例因輸卵管因素行體外受精-胚胎移植(i

2、n vitrofertilization-embryo transfer,IVF-ET)的患者按照隨機(jī)數(shù)字表法分為治療組40例(二至天癸顆粒聯(lián)合促性腺激素(Gn),40個(gè)周期)和對照組40例(安慰劑顆粒聯(lián)合Gn,40個(gè)周期)。采用IVF-ET治療中目前常規(guī)應(yīng)用的控制性超排卵方案,治療組在IVF治療周期加用二至天癸顆粒;對照組則加用安慰劑顆粒。觀察臨床腎虛證候積分變化情況,Gn用量及用藥天數(shù),取卵數(shù)、優(yōu)質(zhì)卵率、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、臨床妊娠

3、率及顆粒細(xì)胞GDNF、GFRα-1mRNA的表達(dá)情況。同時(shí)行顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)24h、48h后觀察E2、P的分泌情況以了解顆粒細(xì)胞的分泌功能。實(shí)驗(yàn)研究:將165只8-9周齡、健康昆明種雌性小鼠按照隨機(jī)法分為空白組、治療組及對照組,每組各55只。治療組及對照組進(jìn)行控制性超排卵,連續(xù)灌胃給藥(治療組用二至天癸顆粒,對照組用等量生理鹽水),三組又各分為1、2兩組。1組50只脫頸處死小鼠,取生發(fā)泡(GV)期裸卵(DOs),觀察生殖泡破裂(GVBD

4、)和第一極體(PB1)釋放;之后成熟卵母細(xì)胞行GDNF、GFRα-1mRNA的表達(dá)檢測;2組各5只雌雄鼠合籠飼養(yǎng),取受精卵,觀察卵裂率、成胚率。結(jié)果:臨床研究:治療組患者腎虛癥狀得到明顯改善,治療組Gn用量及用藥天數(shù)均低于對照組,單個(gè)卵雌激素(E2/卵泡)水平高于對照組,優(yōu)質(zhì)卵率、優(yōu)質(zhì)胚胎率及臨床妊娠率均高于對照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);治療組顆粒細(xì)胞培養(yǎng)24h、48h生長情況,培養(yǎng)24h、48h后收集的培養(yǎng)液E2、P檢測

5、及顆粒細(xì)胞GDNF、GFRα-1mRNA表達(dá)均優(yōu)于對照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)研究:治療組GV期卵母細(xì)胞GVBD率、PB1排出率均高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);各組小鼠受精卵卵裂率及成胚率比較,對照組低于空白組,治療組高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療組卵母細(xì)胞GFRα-1mRNA的表達(dá)高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:1.獲得與既往國家級和省級課題相同的臨床妊娠率(

6、54％左右)。在IVF-ET治療周期,應(yīng)用補(bǔ)腎中藥可明顯改善患者腎虛癥狀,減少Gn用量,提高優(yōu)質(zhì)卵率、優(yōu)質(zhì)胚胎率,進(jìn)而改善臨床妊娠率,是臨床常用的有效藥物。2.補(bǔ)腎中藥提高顆粒細(xì)胞GDNF、GFRα-1mRNA的表達(dá),改善顆粒細(xì)胞分泌功能,這可能是補(bǔ)腎中藥改善IVF結(jié)局的機(jī)制之一。3.補(bǔ)腎中藥促進(jìn)小鼠GV期卵母細(xì)胞生殖泡的破裂(GVBD)和第一極體(PB1)的排出;提高小鼠卵母細(xì)胞GFRα-1mRNA的表達(dá),并改善了小鼠受精卵的卵裂、形