綠茶多酚EGCG自氧化對其抑癌和細胞毒效應的影響及機制研究.pdf

1、分類號：S571.1單位代碼：10364密級：學號：12720272安徽農業(yè)大學安徽農業(yè)大學碩士學位論文綠茶多酚EGCG自氧化對其抑癌和細胞毒效應的影響及機制研究CancerProliferationInhibitonCytotoxicityEffectsofEGCGAutooxidationProducts（EAOPs）theMechanismsInvolved研究生：衛(wèi)亞慶指導教師：張勁松教授合作指導教師：申請學位門類級別：農學碩士

2、專業(yè)名稱：茶學研究方向：茶與健康所在學院：茶與食品科技學院答辯委員會主席：2015年6月I摘要EGCG主要來源于茶樹葉片，是茶葉中含量最豐富的活性物質。綠茶多酚EGCG具有體外抑制癌細胞增殖并殺傷癌細胞的作用，能夠劑量依賴和時間依賴地抑制口腔癌細胞Tca8113和結腸癌細胞CT26的增殖，并對兩種癌細胞系產生細胞毒作用。其中，30μgmL的EGCG作用2天時間可抑制Tca811390%的增殖，20μgmL的EGCG作用3天時間可抑制CT

3、2670%以上的增殖；而50μgmL的EGCG作用2天時間可殺傷80%的Tca8113細胞，100μgmL的EGCG作用2天時間可殺傷60%以上的CT26細胞。EGCG抑制癌細胞增殖的作用和對癌細胞的殺傷作用都與氧化還原相關機制有關。EGCG自氧化能夠產生大量活性氧（Reactiveoxygenspecies，ROS），造成細胞氧化逆境。EGCG產生的ROS中至少包括超氧陰離子（Superoxideanion，?O2）和過氧化氫（Hyd

4、rogenperoxide，H2O2）兩種含氧自由基，當EGCG自氧化體系中加入超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase，SOD）或過氧化氫酶（Catalase，CAT）后，探針可捕捉到的ROS量隨之減少。EGCG還具有抑制重要抗氧化酶硫氧還蛋白還原酶（Thiedoxinreductase，TrxR）的活力，以及清除基礎抗氧化物質谷胱甘肽（Glutathion，GSH）和半胱氨酸（Cysteine，Cys）的能力。茶葉中存

5、在多酚氧化酶和過氧化物酶，可以在細胞破碎的條件下將EGCG氧化為聚合物，如茶黃素、茶紅素等。EGCG在體外的氧化可以通過酶催化或其他條件的設定而實現(xiàn)。37℃水浴條件下，將5mgmLEGCG溶于pH8.0，200mM的PBS中，以1ml管的體積分裝至12100mm的玻璃管中，分別進行2h、4h、8h、16h、32h的自氧化，獲得一系列EGCG的自氧化產物（EGCGautooxidationproducts，EAOPs）。隨著自氧化的進行，

6、溶液顏色肉眼可見地由無色透明逐漸變黃、變紅、變深；可見紫外光譜掃描表明，氧化物在510nm處的吸收逐漸增加，并在250350nm（EGCG最大吸收波長280nm附近）范圍內呈現(xiàn)規(guī)律性的變化。HPLC分析表明，在這種條件下EGCG的氧化速度極快：EAOP2h溶液中只剩余初始EGCG含量的20%，而在EGCG的保留時間附近，出現(xiàn)了一些新的物質峰，但其中并未檢測到茶黃素成分。由于EAOP2h的樣品溶液顏色已經為淺棕色，且其后所有的樣品中也未檢