綠茶多酚EGCG自氧化對(duì)其抑癌和細(xì)胞毒效應(yīng)的影響及機(jī)制研究.pdf_第1頁(yè)
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1、分類號(hào):S571.1單位代碼:10364密級(jí):學(xué)號(hào):12720272安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文綠茶多酚EGCG自氧化對(duì)其抑癌和細(xì)胞毒效應(yīng)的影響及機(jī)制研究CancerProliferationInhibitonCytotoxicityEffectsofEGCGAutooxidationProducts(EAOPs)theMechanismsInvolved研究生:衛(wèi)亞慶指導(dǎo)教師:張勁松教授合作指導(dǎo)教師:申請(qǐng)學(xué)位門類級(jí)別:農(nóng)學(xué)碩士

2、專業(yè)名稱:茶學(xué)研究方向:茶與健康所在學(xué)院:茶與食品科技學(xué)院答辯委員會(huì)主席:2015年6月I摘要EGCG主要來源于茶樹葉片,是茶葉中含量最豐富的活性物質(zhì)。綠茶多酚EGCG具有體外抑制癌細(xì)胞增殖并殺傷癌細(xì)胞的作用,能夠劑量依賴和時(shí)間依賴地抑制口腔癌細(xì)胞Tca8113和結(jié)腸癌細(xì)胞CT26的增殖,并對(duì)兩種癌細(xì)胞系產(chǎn)生細(xì)胞毒作用。其中,30μgmL的EGCG作用2天時(shí)間可抑制Tca811390%的增殖,20μgmL的EGCG作用3天時(shí)間可抑制CT

3、2670%以上的增殖;而50μgmL的EGCG作用2天時(shí)間可殺傷80%的Tca8113細(xì)胞,100μgmL的EGCG作用2天時(shí)間可殺傷60%以上的CT26細(xì)胞。EGCG抑制癌細(xì)胞增殖的作用和對(duì)癌細(xì)胞的殺傷作用都與氧化還原相關(guān)機(jī)制有關(guān)。EGCG自氧化能夠產(chǎn)生大量活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS),造成細(xì)胞氧化逆境。EGCG產(chǎn)生的ROS中至少包括超氧陰離子(Superoxideanion,?O2)和過氧化氫(Hyd

4、rogenperoxide,H2O2)兩種含氧自由基,當(dāng)EGCG自氧化體系中加入超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)或過氧化氫酶(Catalase,CAT)后,探針可捕捉到的ROS量隨之減少。EGCG還具有抑制重要抗氧化酶硫氧還蛋白還原酶(Thiedoxinreductase,TrxR)的活力,以及清除基礎(chǔ)抗氧化物質(zhì)谷胱甘肽(Glutathion,GSH)和半胱氨酸(Cysteine,Cys)的能力。茶葉中存

5、在多酚氧化酶和過氧化物酶,可以在細(xì)胞破碎的條件下將EGCG氧化為聚合物,如茶黃素、茶紅素等。EGCG在體外的氧化可以通過酶催化或其他條件的設(shè)定而實(shí)現(xiàn)。37℃水浴條件下,將5mgmLEGCG溶于pH8.0,200mM的PBS中,以1ml管的體積分裝至12100mm的玻璃管中,分別進(jìn)行2h、4h、8h、16h、32h的自氧化,獲得一系列EGCG的自氧化產(chǎn)物(EGCGautooxidationproducts,EAOPs)。隨著自氧化的進(jìn)行,

6、溶液顏色肉眼可見地由無色透明逐漸變黃、變紅、變深;可見紫外光譜掃描表明,氧化物在510nm處的吸收逐漸增加,并在250350nm(EGCG最大吸收波長(zhǎng)280nm附近)范圍內(nèi)呈現(xiàn)規(guī)律性的變化。HPLC分析表明,在這種條件下EGCG的氧化速度極快:EAOP2h溶液中只剩余初始EGCG含量的20%,而在EGCG的保留時(shí)間附近,出現(xiàn)了一些新的物質(zhì)峰,但其中并未檢測(cè)到茶黃素成分。由于EAOP2h的樣品溶液顏色已經(jīng)為淺棕色,且其后所有的樣品中也未檢

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