α-MSH對人皮膚和增生性瘢痕成纖維細胞作用的蛋白質組研究.pdf

1、背景；Alpha-促黑素(a-MSH)是一種神經內分泌激素，隨著近年人們對a-MSH在皮膚色素調節(jié)、黑色素瘤的發(fā)生及炎癥免疫等方面調節(jié)作用的深入了解，開始有人注意到a-MSH與瘢痕等纖維化疾病的關系，但國內外尚無a-MSH與瘢痕成纖維細胞作用的文獻報道。在后基因組的研究中，蛋白質組無疑是最重要的組成部分，它使得從整體上觀察a-MSH對人皮膚和增生性瘢痕成纖維細胞蛋白質表達的影響成為可能。蛋白質組技術鑒定u-MSH作用的相關蛋白質，有助于

2、進一步了解u-MSH對人皮膚和增生性瘢痕成纖維細胞作用的模式，有可能使a-MSH成為治療瘢痕的一種新方法。 目的：比較a-MSH處理前后人皮膚和增生性瘢痕成纖維細胞蛋白質表達譜的變化，從整體的蛋白質水平對a-MSH抑制成纖維細胞分泌細胞外基質的分子機理進行初步探索，同時為增生性瘢痕的發(fā)病機制研究提供線索。 方法:a-MSH處理體外培養(yǎng)的人皮膚和增生性瘢痕成纖維紐胞，利用固相pH梯度(IPG)雙向凝膠電泳(2-DE)分

3、離a-MSI-t處理前后人皮膚和增生性瘢痕成纖維細胞的總蛋自質，考馬斯亮藍顯色，建立雙向凝膠電泳圖譜，經FDQuest軟件圖像分析，選取部分差異表達的蛋白質，應用基質輔助激光解吸電禽飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)分析獲取肽質量指紋圖譜，Mascot<'TM>軟件搜索MSDB數(shù)據庫鑒定蛋白質。 結果：(1)得到了分辨率和重復性較好的α-MSH處理前后人皮膚和增生性瘢痕成纖維細胞雙向凝膠電池圖譜,人皮膚成纖維細胞對照組和

4、處理組各3塊凝膠的平均蛋白質點數(shù)分別為634±15和591±20，平均匹配率分尉為81％和87％。對照組和處理組3塊不同的膠闖蛋白質點在等電聚焦(mF)方向的偏差為0.73±0.29mm和0.83±0.53,在SDS-PAGE方向上的偏差為1.2±0.37mm和1.50.46mm。增生性瘢痕成纖維細胞對照組和處理組各3塊凝膠的平均蛋白質點數(shù)分別為602±32和75918，平均匹配率分別為85％和89％。對照組和處理組3塊不同的膠間蛋白質

5、點在IEF方向的偏差為0.86±0.23mm和0.69±0.17mm，在SDS-PAGE方向上的偏差為1.3±0.31mm和1.5±0.22mm。分別制得未處理組和α-MSH處理組平均膠，以平均膠進行匹配，皮膚成纖維細胞組匹配率為81.2％，增生性瘢痕成纖維細胞組匹配率為81.9[％],皮膚與增生性瘢痕對照組匹配率為20.3％，處理組為15.1％。(2)篩選出差異表達蛋白質點23個進行質譜分析，從中獲得20張較好的肽質量指紋，經查詢蛋白

6、質序列數(shù)據庫鑒定了annexin 1、熱休克蛋白27、波形蛋白、laminA和組織蛋白酶B等的11個差異表達蛋白質。 結論:本研究建立了分辨高且重復性較好的α-MSH處理前后人皮膚和增生性瘢痕成纖維細胞雙向凝膠電冰圖譜,并識別訓鑒定出了11種差異表達的蛋白質，實驗證明α-MSH的抗纖維化機制可能涉及細胞凋亡、細胞內信號轉導及細胞骨架構建等方面，為α-MSH在臨床的運用，治療增生性瘢痕等纖維化疾病奠立了初步基礎，提供了實驗依據