通心絡(luò)聯(lián)合阿托伐他汀、阿司匹林對(duì)新西蘭兔動(dòng)脈粥樣硬化早期勁動(dòng)脈外膜滋養(yǎng)血管新生相關(guān)炎癥機(jī)制的影響.pdf

1、目的:本研究通過采用單側(cè)頸動(dòng)脈硅膠管包裹聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)[16]的方法，建立新西蘭兔動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis AS)早期模型并進(jìn)行藥物干預(yù)，通過觀察新西蘭兔AS早期頸動(dòng)脈形態(tài)、血脂變化、頸動(dòng)脈外膜與滋養(yǎng)血管(Vasa Vasorum VV)新生相關(guān)因子和炎癥因子的表達(dá)等，以深入探討“金三角”方案（ATS方案[17]）即阿托伐他汀+通心絡(luò)+阿司匹林聯(lián)合應(yīng)用對(duì)新西蘭兔AS早期模型及管壁VV新生相關(guān)炎癥機(jī)制的干預(yù)作用，為中

2、西醫(yī)結(jié)合防治AS早期病變提供新思路，開辟新途徑。
　　方法:
　　1、“金三角”方案對(duì)新西蘭兔動(dòng)脈粥樣硬化早期模型的干預(yù)作用
　　將90只健康雌雄各半新西蘭白兔適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后，隨機(jī)地分為:對(duì)照組;模型組;通心絡(luò)組(TXL);阿托伐他汀組(ATO);阿司匹林組(ASP);“金三角”組(ATS);每組15只，對(duì)照組給予普通飼料，模型組及各用藥組動(dòng)物均實(shí)施單側(cè)頸動(dòng)脈硅膠管包裹術(shù)復(fù)合高脂飼料喂養(yǎng)。根據(jù)人與動(dòng)物用藥量體表面積計(jì)

3、算法及有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道:臨灌胃時(shí)用0.5％的羧甲基纖維素鈉水溶液將通心絡(luò)超微粉、阿托伐他汀和阿司匹林配成相應(yīng)濃度的混懸液，體積均為3ml·Kg-1，其中TXL組以通心絡(luò)超微粉混懸液0.3g·Kg-1·d-1灌胃;ATO組予阿托伐他汀混懸液2.5mg·Kg-1·d-1灌胃;ASP組給予阿司匹林混懸液12mg·Kg-1·d-1灌胃;ATS組給予通心絡(luò)超微粉混懸液0.3g·Kg-1·d-1加阿托伐他汀混懸液2.5mg·Kg-1·d-1加阿司匹林混

4、懸液12mg·Kg-1·d-1灌胃，對(duì)照組和模型組給予等體積的0.5％的羧甲基纖維素鈉水溶液灌胃，連續(xù)喂養(yǎng)4周后取材，HE染色后利用光鏡觀察包管處頸動(dòng)脈病理形態(tài)變化;生化法檢測(cè)血清TC、TG、LDL-C水平;彩色微球檢測(cè)AS早期頸動(dòng)脈血流灌注情況。
　　2、“金三角”方案對(duì)新西蘭兔動(dòng)脈粥樣硬化早期頸動(dòng)脈外膜滋養(yǎng)血管新生的干預(yù)作用
　　在成功建立AS早期模型的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討“ATS”方案對(duì)頸動(dòng)脈外膜上與VV新生相關(guān)因子表達(dá)

5、的影響，實(shí)驗(yàn)造模、分組、給藥及取材方法同第一部分。于實(shí)驗(yàn)?zāi)庖呓M化法檢測(cè)頸動(dòng)脈外膜CD34表達(dá)情況;RT-PCR、Western blot檢測(cè)頸動(dòng)脈組織血管生長(zhǎng)因子及其受體(VEGF、VEGFR-2)的表達(dá)情況;ELISA法檢測(cè)血管外膜內(nèi)皮抑素(Endostatin ES)的表達(dá)水平。
　　3、“金三角”方案對(duì)新西蘭兔動(dòng)脈粥樣硬化早期頸動(dòng)脈外膜炎癥機(jī)制的干預(yù)作用
　　本部分是在前兩部分實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)ATS方案干預(yù)AS早期

6、頸動(dòng)脈外膜上與血管新生相關(guān)炎癥因子及與頸動(dòng)脈外膜VV新生相關(guān)炎癥機(jī)制涉及分子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用進(jìn)行更深層次的觀察。實(shí)驗(yàn)造模、分組、給藥及取材方法同第一部分，實(shí)驗(yàn)?zāi)琑T-PCR檢測(cè)頸動(dòng)脈組織單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、NF-κB的表達(dá)情況;ELISA法測(cè)定各組頸動(dòng)脈包裹段外膜白介素-6(IL-6)表達(dá)水平，免疫組化法檢測(cè)血管外膜MCP-1、IL-8、NF-κB表達(dá)情況，Western blot檢頸動(dòng)脈組織

7、NF-κB的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1、“金三角”方案對(duì)新西蘭兔動(dòng)脈粥樣硬化早期模型的干預(yù)作用
　　1.1各組頸動(dòng)脈形態(tài)觀察
　　1.1.1頸動(dòng)脈HE染色結(jié)果
　　對(duì)照組:內(nèi)皮細(xì)胞完整，胞核扁平，與內(nèi)彈力板貼合緊密。中層平滑肌細(xì)胞排列整齊;模型組:內(nèi)膜層不完整，內(nèi)皮細(xì)胞部分脫落，內(nèi)膜層明顯增厚，可見少量泡沫狀巨噬細(xì)胞形成;各用藥組內(nèi)膜層部分增厚，但較模型組程度減輕，以ATO組、TXL組及ATS組改善明顯

8、。
　　1.2各組血脂變化
　　與對(duì)照組比較，模型組血清中TC、TG、LDL-C表達(dá)水平顯著升高(P＜0.01)，除阿司匹林組外，與模型組比較，各用藥組血清TC、TG、LDL-C表達(dá)水平降低(P＜0.01，P＜0.05);ATS組與TXL組、ATO組、ASP組比較，血清TC、TG、LDL-C表達(dá)水平降低(P＜0.01)，其余各用藥組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　1.3彩色微球檢測(cè)AS早期微血管灌注情況

9、>　　與對(duì)照組比較，模型組頸動(dòng)脈微血管血流量增加(P＜0.01);其余各用藥組較模型組頸動(dòng)脈微血管血流量減少（P＜0.01）;與其他各用藥組比較，ATS組微血管血流量明顯減少(P＜0.01);ATO組與ASP組比較微血管血流量減少(P＜0.05)，TXL組、ASP組組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無顯著性(P＞0.05)。
　　2、“金三角”方案對(duì)新西蘭兔動(dòng)脈粥樣硬化早期頸動(dòng)脈外膜滋養(yǎng)血管新生的干預(yù)作用
　　2.1各組頸動(dòng)脈外膜CD34表

10、達(dá)水平
　　與對(duì)照組比較，模型組CD34在頸動(dòng)脈外膜新生VV處表達(dá)增多;與模型組比較，各用藥組頸動(dòng)脈外膜上CD34表達(dá)減少。
　　2.2各組頸動(dòng)脈組織VEGF、VEGFR-2基因和蛋白表達(dá)水平
　　與對(duì)照組比較，模型組VEGFmRNA、VEGFR-2mRNA表達(dá)明顯升高，(P＜0.01);與模型組比較，各用藥組VEGFmRNA、VEGFR-2mRNA表達(dá)均明顯降低(P＜0.01，P＜0.05);與其他用藥組比較，ATS

11、組VEGFmRNA、VEGFR-2mRNA表達(dá)降低(P＜0.01)，TXL組、ATO組及ASP組組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無顯著性(P＞0.05)。
　　與對(duì)照組比較，模型組VEGF、VEGFR-2蛋白表達(dá)明顯升高，(P＜0.01);與模型組比較，各用藥組VEGF、VEGFR-2蛋白表達(dá)均明顯降低(P＜0.01，P＜0.05);ATS組VEGF、VEGFR-2蛋白表達(dá)低于TXL組、ATO組及ASP組（P＜0.01，P＜0.05）;與ASP

12、組比較， TXL組、ATO組VEGFR-2蛋白表達(dá)均明顯降低(P＜0.05)，TXL組、ATO組組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無顯著性(P＞0.05)。
　　2.3各組頸動(dòng)脈外膜組織ES的表達(dá)水平
　　與對(duì)照組比較，模型組ES表達(dá)明顯減少(P＜0.01);與模型組比較，各用藥組ES表達(dá)明顯增多(P＜0.01);與其他各用藥組比較，ATS組ES表達(dá)增多(P＜0.01);與ASP組比較，TXL組、ATO組ES表達(dá)增多（P＜0.01），TXL

13、組、ATO組組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無顯著性(P＞0.05)。
　　3、“金三角”方案對(duì)新西蘭兔動(dòng)脈粥樣硬化早期頸動(dòng)脈外膜炎癥機(jī)制的干預(yù)作用
　　3.1各組頸動(dòng)脈組織MCP-1 mRNA、IL-8mRNA、IL-6的表達(dá)水平
　　與對(duì)照組比較，模型組MCP-1 mRNA、IL-8mRNA、IL-6表達(dá)明顯升高(P＜0.01);各用藥組與模型組比較，MCP-1mRNA、IL-8mRNA、IL-6表達(dá)降低(P＜0.01，P＜0.

14、05);ATS組與其他用藥組分別比較，MCP-1mRNA、IL-8mRNA、IL-6表達(dá)降低(P＜0.01);其他各用藥組之間兩兩比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無顯著性(P＞0.05)。
　　3.2各組頸動(dòng)脈外膜MCP-1、IL-8、NF-κB的表達(dá)水平
　　與對(duì)照組比較，模型組MCP-1、IL-8、NF-κB在血管外膜VV處表達(dá)增多;與模型組比較，各用藥組頸動(dòng)脈外膜上MCP-1、IL-8、NF-κB表達(dá)減少。
　　3.3各組頸動(dòng)脈核

15、NF-κB基因和蛋白的表達(dá)水平
　　與對(duì)照組比較，模型組NF-κB基因和蛋白表達(dá)明顯升高(P＜0.01);與模型組比較，TXL、ATO、ASP、ATS組NF-κB基因和蛋白表達(dá)明顯降低(P＜0.01);ATS組NF-κB基因和蛋白表達(dá)均低于其他用藥組(P＜0.01，P＜0.05)，其余組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異無顯著性（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　本研究采用單側(cè)頸動(dòng)脈硅膠管包裹聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)建立AS早期模型，同時(shí)給予藥