銅藻中植物甾醇類成分的提取與分離方法研究.pdf

1、銅藻（Sargassum horneri）是一類可食用褐藻，不僅富含礦物質(zhì)及多種人體必需氨基酸，還含有多糖、蛋白質(zhì)等多種生物活性成分。目前國內(nèi)外研究大多集中于其大分子活性物質(zhì)，而對(duì)于低極性的植物甾醇等小分子化合物的研究則相對(duì)較少。研究表明植物甾醇能抑制人體對(duì)膽固醇的吸收，有效地降低人體中低密度脂蛋白的濃度，并具有抗腫瘤、抗炎、抗糖尿病等作用。然而因?yàn)楹枯^低、結(jié)構(gòu)相似等特點(diǎn)，傳統(tǒng)的分離分析方法效率不高，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。因此，本論文結(jié)合熱回流提

2、取技術(shù)、液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)、高速逆流色譜技術(shù)等現(xiàn)代分離分析手段，探索和建立了銅藻中植物甾醇類成分的高效提取、分析與分離方法。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1、研究建立了銅藻中植物甾醇類物質(zhì)的提取工藝。以銅藻為原料，采用95％乙醇熱回流、皂化提取銅藻中的植物甾醇類物質(zhì)。以巖藻甾醇的峰面積為響應(yīng)值，采用單因素實(shí)驗(yàn)考察回流提取中的溫度、時(shí)間和液料比對(duì)巖藻甾醇提取率的影響，利用3因素3水平的響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)得到銅藻中植物甾醇的最優(yōu)提取工藝為:液料比2

3、0 mL/g，提取時(shí)間157 min，溫度85℃。在此條件下得到巖藻甾醇的峰面積與預(yù)測值僅差1.39％，表明該響應(yīng)面模型及其結(jié)果準(zhǔn)確、可信。
　　2、研究建立了銅藻中植物甾醇類成分的液質(zhì)聯(lián)用快速分析方法。根據(jù)高效液相色譜-高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜獲得的精確分子量確定化合物的分子式。通過選定的母離子經(jīng)二級(jí)質(zhì)譜分析得到的子離子等分子結(jié)構(gòu)碎片進(jìn)行質(zhì)譜解析，分析鑒定了銅藻提取物中的10個(gè)化合物，并在此基礎(chǔ)上總結(jié)了植物甾醇類物質(zhì)的質(zhì)譜裂解規(guī)律。實(shí)

4、驗(yàn)結(jié)果表明液質(zhì)聯(lián)用方法分析速度快，尤其對(duì)含量較低的成分也有較好的分析效果，非常適用于銅藻中微量甾醇類成分的快速檢測與鑒定。
　　3、研究建立了銅藻植物甾醇提取物中3個(gè)化合物單體的高速逆流色譜分離方法。采用正己烷-乙腈-甲醇(5∶5∶6，v/v)為逆流色譜兩相溶劑體系，一次性從300 mg銅藻植物甾醇提取物中制備分離得到3.1 mg馬尾藻甾醇，19.8 mg植醇和23.7 mg巖藻甾醇，純度分別為80.09％，93.29％，88.1