中藥新藥加味佛手散膠囊的制劑及其藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　研究“加味佛手散”膠囊制劑工藝，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、穩(wěn)定性、藥代動(dòng)力學(xué)以及對肝臟CYP450酶活性，為創(chuàng)制中藥新藥“加味佛手散膠囊”提供相應(yīng)試驗(yàn)資料。
　　方法：
　　1.加味佛手散膠囊的制備工藝研究軟材過篩制粒法將原料藥制備成顆粒后裝膠囊。以制粒難易度、顆粒的硬度、均勻度、細(xì)粉率、吸濕百分率、流動(dòng)性、堆密度等為指標(biāo)，優(yōu)化填充劑（可溶性淀粉、乳糖、微晶纖維素），主藥與填充劑的篩選比例(1∶0.2、1∶0.5、1∶1、

2、1∶2)，黏合劑(PVP-K30、HPMC、CMC-Na)，HPMC的型號(HPMC-K100M、HPMC-K15M、HPMC-K4M)，HPMC-K15M的篩選用量(0.2％、0.5％、0.8％、1％)以及助流劑硬脂酸鎂的用量，篩選出加味佛手散膠囊的最佳制備工藝。
　　2.加味佛手散膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究建立加味佛手散膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):①性狀:外觀、性狀和顏色。②鑒別:采用含量測定項(xiàng)下的方法，鑒別受試品溶液HPLC圖中各主峰與對照品溶

3、液中的各主峰保留時(shí)間是否一致。③檢查:按照《中國藥典》2010版一部附錄Ⅰ制劑通則ⅠE膠囊劑項(xiàng)下檢查裝量差異、粒度、水分和溶出度。④含量測定:采用HPLC法測定加味佛手散膠囊中的A、B、C的含量。擬定加味佛手散膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（草案）及起草說明。
　　3.加味佛手散膠囊的穩(wěn)定性研究(1)穩(wěn)定性影響因素試驗(yàn):通過60±2℃的高溫試驗(yàn)、25℃條件下90％±5％和75％±5％的高濕度試驗(yàn)與4500Lx±500Lx的強(qiáng)光照射試驗(yàn)考察加味佛手散

4、膠囊的穩(wěn)定性。(2)加速穩(wěn)定性試驗(yàn):通過在40℃、75％±5％的濕度下6個(gè)月的加速試驗(yàn)考察加味佛手散膠囊的穩(wěn)定性。(3)長期穩(wěn)定性試驗(yàn):通過在25℃±2℃，65％±5％的濕度下9個(gè)月的長期試驗(yàn)考察加味佛手散膠囊的穩(wěn)定性。
　　4.加味佛手散膠囊在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究(1)采用高效液相色譜法分別測定大鼠血漿樣品加味佛手散組方中A組分、B組分以及C組分的含量，分別進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。(2)將20只SD雌性大鼠隨機(jī)分為2組，每組10只，

5、按180mg·kg-1劑量灌胃和尾靜脈注射加味佛手散原料藥，于0、5、10、20、30、60、120、240、480、720 min眼眶取血，檢測不同時(shí)間點(diǎn)血漿中的藥物濃度。利用DAS3.2.1軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Cmax、Tmax、t1/2、 AUC(0-t)、AUC(0-∞)以及MRT(0-∞)，計(jì)算出絕對生物利用度。(3)將20只雌性大鼠隨機(jī)分為2組，每組10只，一組為正常組，另一組為子宮內(nèi)膜異位癥模型組，按180 mg·kg-1的

6、劑量灌胃給予膠囊內(nèi)容物。灌胃后0、5、10、20、30、60、120、240、480、720 min眼眶取血，檢測不同時(shí)間點(diǎn)血漿中的藥物濃度。采用DAS3.2.1軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Cmax、Tmax、 t1/2、 AUC(0-t)、AUC(0-∞)以及MRT(0-∞)。
　　結(jié)果：
　　1.加味佛手散膠囊的制備工藝研究結(jié)果稱取適量A組分、B組分、C組分三藥的混合藥粉1.8 g，按主藥與填充劑的比例1∶0.5加入乳糖0.9 g

7、以及黏合劑0.5％HPMC-K15M0.25 mL制軟才，過篩制粒，干燥，再過篩整粒，填入膠囊，密封，鋁塑泡罩包裝，即得。以此工藝條件制備的三批加味佛手散膠囊色澤一致，顆粒均勻，成型率高，流動(dòng)性好，吸濕率低。綜合評定表明此工藝條件穩(wěn)定、可行，為膠囊的最佳成型工藝。
　　2.加味佛手散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究結(jié)果(1)性狀:本品為鋁塑泡罩包裝，膠囊內(nèi)容物為淡黃色顆粒。(2)鑒別:采用含量測定項(xiàng)下的檢測方法分析受試品，其溶液HPLC圖中各主峰與

8、對照品溶液HPLC圖中各主峰的保留時(shí)間一致。(3)檢查:本品的粒度、裝量差異、水分和溶出度均符合藥典要求。(4)含量測定:測定了本品的三個(gè)批次含量，膠囊的A組分、B組分、C組分的相對含量均在98％～105％，符合藥典規(guī)定。以上質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究結(jié)果表明，有關(guān)指標(biāo)能夠控制加味佛手散膠囊質(zhì)量。
　　3.加味佛手散膠囊的穩(wěn)定性研究結(jié)果，長期穩(wěn)定性試驗(yàn):9個(gè)月試驗(yàn)期間，本品中上述3種組成成分與對照品色譜峰保留時(shí)間一致，性狀、粒徑均保持不變，含量

9、以及溶出度略微下降，但仍符合藥典規(guī)定。以上穩(wěn)定性考察結(jié)果表明，在考察期間內(nèi)，相關(guān)質(zhì)量控制指標(biāo)基本穩(wěn)定。
　　4.加味佛手散膠囊在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果(1)加味佛手散組方的生物利用度考察:加味佛手散組方中A組分、B組分、C組分在灌胃給藥途徑的AUC(0-∞)分別為31.77±8.64 mg·h·L-1、97.70±15.26 mg·h·L-1、44.22±10.85 mg·h·L-1;在靜脈注射給藥途徑的AUC(0～∞)分別

10、為44.35±17.08 mg·h·L-1、139.65±22.28mg·h·L-1、61.43±7.76 mg·h·L-1。結(jié)果顯示:A組分、B組分、C組分的絕對生物利用度分別為71.63％、69.96％、71.98％。說明加味佛手散組方灌胃給藥生物利用度高，吸收好，適合制成口服劑型。(2)加味佛手散膠囊在生理和子宮內(nèi)膜異位癥病理模型大鼠的藥代動(dòng)力學(xué)比較:子宮內(nèi)膜異位癥病理狀態(tài)下加味佛手散中A組分的吸收分布與正常大鼠沒有顯著性差異(P

11、＞0.05);B組分的Tmax較正常大鼠顯著縮短(P＜0.05)，提示在病理狀態(tài)下B組分進(jìn)入體內(nèi)的吸收速度較正常更快;在病理模型中C組分的Cmax、AUC(0-t)和AUC(0-∞)顯著高于正常大鼠(P＜0.05)，表明C組分在病理狀態(tài)下的吸收程度較正常狀態(tài)下高。以上結(jié)果表明了臨床應(yīng)用加味佛手散膠囊治療子宮內(nèi)膜異位疾病的合理性。
　　5.加味佛手散膠囊對肝微粒體CYP450酶活性的影響研究結(jié)果(1)對體外人肝微粒體CYP450酶活

12、性的抑制試驗(yàn):A組分和B組分對5種CYP450的IC50無法求出，提示A組分和B組分對人肝微粒體5種CYP450酶活性無體外抑制作用;C組分對CYP2D6的IC50為9.24μmol·L-1，小于10μmol·L-1，大于1μmol·L-1，提示C組分對人肝微粒體CYP2D6的酶活性有較強(qiáng)的體外抑制作用;加味佛手散膠囊組對CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的IC50分別為123.9 mg·L-1、189.9 mg·L-1、171.

13、3 mg·L-1，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于最高濃度的一半1600 mg·L-1，提示加味佛手散膠囊對人肝微粒體CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的酶活性具有體外抑制作用。(2)對體外大鼠肝微粒體CYP450酶活性的抑制試驗(yàn):A組分和B組分對5種CYP450的IC50無法求出，提示A組分和B組分對大鼠肝微粒體5種CYP450酶活性體外無抑制作用;C組分對CYP3A4的IC50為7.46μmol·L-1，小于10μmol·L-1，大于1μmol·L-

14、1，提示C組分對大鼠肝微粒體CYP3A4的酶活性有較強(qiáng)的體外抑制作用;加味佛手散膠囊組對CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的IC50分別為241.3 mg·L-1、369.8 mg·L-1、293.0 mg·L-1，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于最高濃度的一半1600 mg·L-1，提示加味佛手散膠囊對大鼠肝微粒體CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的酶活性具有體外抑制作用。(3)對大鼠體內(nèi)肝微粒體CYP450酶活性的誘導(dǎo)試驗(yàn):與陰性對照組比較，A

15、、B、C3個(gè)單體成分組5種CYP450亞型的酶活性均無顯著性差異(P＞0.05)，加味佛手散膠囊180 mg·kg-1·d-1組和加味佛手散復(fù)方(A+B+C)組CYP1A2、CYP2C9、CYP3A4的酶活性顯著升高(P＜0.05)，提示A、B、C3個(gè)單體成分對大鼠肝微粒體5種CYP450的酶活性均無誘導(dǎo)作用，加味佛手散膠囊對大鼠肝臟的CYP1A2、CYP2C9、CYP3A4的酶活性具有誘導(dǎo)作用。
　　6.加味佛手散膠囊對大鼠肝細(xì)

16、胞形態(tài)的影響試驗(yàn)結(jié)果:用藥后A組分和B組分組肝細(xì)胞形態(tài)正常，C組分組肝小葉界限不清，肝細(xì)胞排列紊亂，邊緣模糊，細(xì)胞核大小不均，炎細(xì)胞浸潤。加味佛手散組方組、加味佛手散膠囊組有炎細(xì)胞浸潤，但病理變化程度明顯較C組分組輕微。顯示加味佛手散膠囊全方能減少C組分單獨(dú)使用對肝臟細(xì)胞形態(tài)的損傷。
　　結(jié)論：
　　1.研究獲得了抗子宮內(nèi)膜異位癥的中藥新藥制劑加味佛手散膠囊的制備工藝，該工藝操作簡單，穩(wěn)定性良好。
　　2.生物利用度研

17、究顯示加味佛手散組方灌胃給藥生物利用度高，適合制成口服劑型。加味佛手散膠囊中B組分的吸收速度和C組分的吸收程度在子宮內(nèi)膜異位癥病理模型大鼠體內(nèi)均顯著優(yōu)于正常大鼠，顯示了加味佛手散膠囊治療子宮內(nèi)膜異位癥藥代動(dòng)力學(xué)的合理性。
　　3.加味佛手散膠囊體內(nèi)試驗(yàn)?zāi)茱@著誘導(dǎo)大鼠肝臟CYP1A2、CYP2C9、CYP3A4的酶活性;體外試驗(yàn)對人和大鼠肝微粒體CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4活性均有顯著的抑制作用。提示加味佛手散膠囊如果與