開菲爾中菌種資源的分離培養(yǎng)與部分功能菌株研究.pdf

1、開菲爾酸奶是一種歷史悠久的發(fā)酵乳制品，由乳酸菌、醋酸菌、酵母菌等多種益生菌組成。開菲爾酸奶含有豐富的活性物質(zhì)，具有多種益生功能。乳酸菌產(chǎn)生的細(xì)菌素可以殺死食品中的腐敗微生物，它天然健康，無毒、無害，因此在對(duì)新型食品防腐劑的研發(fā)領(lǐng)域具有很大的潛力。除此之外有些乳酸菌菌株具有降膽固醇的功能，因此對(duì)開菲爾菌種的初步分析相當(dāng)于建立了一個(gè)益生菌的資源庫(kù)，為后續(xù)益生功能的研究奠定了基礎(chǔ)?；谝陨媳尘埃菊撐牡难芯?jī)?nèi)容主要包括開菲爾菌種的篩選和鑒定，

2、開菲爾菌種宏基因組的測(cè)序分析，開菲爾中乳酸菌產(chǎn)細(xì)菌素菌株的初步篩選，開菲爾中乳酸菌降膽固醇菌株的初步篩選。（1）開菲爾菌種的篩選及細(xì)菌16SrDNA和酵母菌26SrDNA的鑒定：分別用MRS、AC、YEPD培養(yǎng)基分離，隨后采用細(xì)菌16SrDNA和酵母菌26SrDNA的PCR擴(kuò)增技術(shù)，并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行序列比對(duì)。結(jié)果得到6種乳酸菌，分別是：腸膜明串球菌（Leuconostoc mesenteroides），腸膜明串球菌亞種（Leuconos

3、toc mesenteroidessubsp.mesenteroides），乳酸乳球菌（Lactococcus lactis），乳酸乳球菌亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis），植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum），植物乳桿菌亞種（Lactobacillus plantarumsubsp.plantarum），共47株；3種醋酸菌，分別是東方醋酸菌（Acetobacter ori

4、entalis），沖繩醋酸菌（Acetobacter okinawensis），株醋酸菌（Acetobacter ghanensis），共19株；1種酵母菌為（Kazachstania unispora）哈薩克斯坦酵母，共7株；除此之外還有1株嗜熱鏈球菌（Streptococcus thermophilus）和4株糞腸球菌（Enterococcus faecalis）。
　?。?）開菲爾菌種宏基因組的測(cè)序分析：開菲爾組成復(fù)雜，乳酸

5、菌是其優(yōu)勢(shì)菌種，并且不同來源的開菲爾菌群具有高度相似性。從門水平觀察，開菲爾菌群主要由硬壁菌門和變形菌門組成，從屬的水平觀察主要由乳酸菌屬和醋酸桿菌屬組成，其次是鏈球菌屬和芽孢桿菌屬,而丙酸桿菌屬、紅螺菌科、新鞘氨醇桿菌所占比例極小。
　?。?）開菲爾中乳酸菌產(chǎn)細(xì)菌素菌株的初步篩選：實(shí)驗(yàn)采用牛津杯法對(duì)從開菲爾酸奶中分離鑒定出的乳酸菌菌株進(jìn)行抑菌圈實(shí)驗(yàn)，篩選2次，結(jié)果表明這些乳酸菌菌株對(duì)酵母菌沒有抑菌活性，對(duì)四種細(xì)菌指示菌均有抑菌效

6、果，其中四株乳酸乳球菌亞種（Lactococcus lactissubsp.lactis）產(chǎn)生的抑菌圈直徑較為明顯。
　?。?）開菲爾中乳酸菌降膽固醇菌株的初步篩選：對(duì)開菲爾酸奶中分離鑒定出的乳酸菌菌株進(jìn)行篩選，篩選2次，結(jié)果表明有17株菌的降膽固醇能力較好，其中一株為腸膜明串球菌亞種（Lc mesenteulides subsp. mesenteulides）；另一株為乳酸乳球菌亞種（Lactococcus lactissubs