乳牛肝菌菌種的分離、鑒定及培養(yǎng).pdf

1、牛肝菌是森林生態(tài)系統(tǒng)中的重要生物類群之一，菌絲體與植物根系結(jié)合形成菌根，使植物生長成為可能，使不同種類植物的根系聯(lián)在一起，有助于提高森林生態(tài)系統(tǒng)中植物的多樣性、穩(wěn)定性和生產(chǎn)力，增加植物一土壤間的聯(lián)系，改善土壤結(jié)構(gòu)，促進(jìn)土壤微生物生長，增強(qiáng)植物器官的功能，促進(jìn)造林或育苗成活與生長。牛肝菌中的許多種類是分布極廣的具有經(jīng)濟(jì)價值的著名藥食兩用真菌，具有很高的營養(yǎng)價值和獨(dú)特的藥用價值。開展牛肝菌子實(shí)體的誘導(dǎo)和栽培研究是國內(nèi)外微生物和食用菌研究人員

2、十分關(guān)注的研究課題。牛肝菌人工馴化栽培的關(guān)鍵是批量生產(chǎn)純菌種，其難點(diǎn)是難以獲得純菌種以及菌種生長速度緩慢?；诖?，本文對乳牛肝菌的子實(shí)體進(jìn)行了菌種分離和分子鑒定，并研究了菌種培養(yǎng)、發(fā)酵液產(chǎn)酶情況以及乳牛肝菌子實(shí)體內(nèi)部及附生微生物的多樣性。主要研究內(nèi)容如下： 1.乳牛肝菌菌種的分離及鑒定：采用組織分離法從乳牛肝菌子實(shí)體分離得到純培養(yǎng)菌絲體，由于乳牛肝菌是外生菌根菌，無法人工栽培，而傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)方法難以鑒定其真?zhèn)危什捎肐TS序列分

3、析方法對其進(jìn)行分子鑒定，同時構(gòu)建進(jìn)化樹，初步分析乳牛肝菌的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。 2.乳牛肝菌菌種的培養(yǎng)：對牛肝菌母種培養(yǎng)基進(jìn)行篩選試驗(yàn)，開展液體和固體培養(yǎng)研究。結(jié)果表明：牛肝菌母種在葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基基上生長最好，可用此培養(yǎng)基進(jìn)行乳牛肝菌的液體發(fā)酵；對多種固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)比較實(shí)驗(yàn)表明，乳牛肝菌在麥粒培養(yǎng)基上生長最好，在甘蔗渣培養(yǎng)基上長勢次之，而在其它幾種培養(yǎng)基上未生長。 3.乳牛肝菌液體培養(yǎng)的胞外酶活性研究：測定了乳牛肝菌液體

4、培養(yǎng)時的胞外酶活性，并同時與幾種白腐真菌的胞外酶活性作對比。結(jié)果表明乳牛肝菌在整個培養(yǎng)過程中不產(chǎn)纖維素酶、半纖維素酶和漆酶，而這幾種酶都存在于幾種白腐真菌樹舌、金針菇和靈芝中。 4.乳牛肝菌內(nèi)生及附生微生物多樣性研究：用玻璃粉吸附法提取出乳牛肝菌、美味牛肝菌和硬皮馬勃子實(shí)體及根際土壤的總DNA，并以此為模板，對16srRNA基因V3區(qū)和18s I斟A基因的ITS區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，用DGGE技術(shù)對PCR產(chǎn)物進(jìn)行分離，從而得到數(shù)目不