影響酒石酸泰萬(wàn)菌素口服生物利用度因素的初步研究.pdf

1、為探討影響酒石酸泰萬(wàn)菌素口服生物利用度的因素，本研究采用雞肝原代細(xì)胞模型、Caco-2細(xì)胞模型和小腸灌流模型，體外研究酒石酸泰萬(wàn)菌素代謝消除和吸收轉(zhuǎn)運(yùn)。并通過(guò)抑制CYP3A和P-gp，考察其對(duì)酒石酸泰萬(wàn)菌素在AA肉雞體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)影響。具體分為以下幾個(gè)部分:
　　1.酒石酸泰萬(wàn)菌素生物利用度的研究
　　為了研究酒石酸泰萬(wàn)菌素的口服生物利用度，建立了血漿、培養(yǎng)基和緩沖液中酒石酸泰萬(wàn)菌素的處理及高效液相(HPLC)色譜分析方法。1

2、日齡的AA肉雞飼喂至28日齡后，挑選20只健康雄性肉雞，分為口服和靜脈給藥兩組，每組10只，分別灌服和靜注10 mg·kg-1.b.w的酒石酸泰萬(wàn)菌素溶液。給藥后24 h內(nèi)，翅下靜脈采血，用HPLC法測(cè)定酒石酸泰萬(wàn)菌素血藥濃度，用3P97藥動(dòng)學(xué)軟件分析藥-時(shí)數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示，建立的HPLC方法符合定量檢測(cè)要求。肉雞單劑量口服和靜注酒石酸泰萬(wàn)菌素的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程符合二室開(kāi)放模型?？诜笱獫{中泰萬(wàn)菌素的藥時(shí)曲線下面積(AUC)為0.82μg·mL

3、-1·h，達(dá)峰時(shí)間(Tmax)0.72 h;靜注后血漿中泰萬(wàn)菌素的藥時(shí)曲線下面積(AUC)為6.47μg·mL-1·h。結(jié)果表明，酒石酸泰萬(wàn)菌素口服后，吸收迅速，但口服生物利用度(F)低，僅有12.67％。
　　2.影響酒石酸泰萬(wàn)菌素口服生物利用度部位的定量研究
　　1日齡的AA肉雞飼喂至42日齡后，挑選40只健康雄性肉雞，隨機(jī)分為口服給藥組、十二指腸給藥組、門靜脈給藥組和靜脈給藥組，每組10只。肉雞麻醉后，以10 mg·k

4、g-1劑量按以上給藥方式給予酒石酸泰萬(wàn)菌素溶液。給藥后24 h內(nèi)，翅下靜脈采血，用HPLC法測(cè)定酒石酸泰萬(wàn)菌素血藥濃度，用3P97藥動(dòng)學(xué)軟件分析藥-時(shí)數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示，不同途徑給藥后，酒石酸秦萬(wàn)菌素的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程符合二室開(kāi)放動(dòng)力學(xué)模型。靜脈給藥組的曲線下面積(AUC)顯著高于門靜脈給藥組;靜脈和門靜脈給藥組都顯著高于口服給藥組。結(jié)果表明，酒石酸泰萬(wàn)菌素的口服生物利用度主要受腸道和肝臟影響。腸道影響最大，達(dá)87.2‰其次為肝臟，達(dá)16.2％。

5、
　　3.酒石酸泰萬(wàn)菌素代謝消除和吸收轉(zhuǎn)運(yùn)的體外研究
　　利用肝原代細(xì)胞體外代謝模型、Caco-2單層細(xì)胞體外轉(zhuǎn)運(yùn)模型和腸道灌流模型，分別研究酒石酸泰萬(wàn)菌素的體外代謝消除和體外吸收轉(zhuǎn)運(yùn)。利用肝原代細(xì)胞體外代謝模型，以不同濃度的酒石酸泰萬(wàn)菌素考察代謝消除，并抑制CYP1A和CYP3A活性，考察它們對(duì)酒石酸泰萬(wàn)菌素代謝的影響;運(yùn)用Caco-2單層細(xì)胞體外轉(zhuǎn)運(yùn)模型研究酒石酸泰萬(wàn)菌素吸收特點(diǎn)，同時(shí)考察P-gp對(duì)其轉(zhuǎn)運(yùn)的影響;運(yùn)用腸道

6、灌流模型，添加EGTA和抑制P-gp，分別對(duì)十二指腸、空腸和回腸進(jìn)行單向灌流，考察酒石酸泰萬(wàn)菌素吸收的主要腸段和P-gp對(duì)酒石酸泰萬(wàn)菌素轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。結(jié)果顯示，酒石酸泰萬(wàn)菌素在肝細(xì)胞中存在著代謝消除，而且有時(shí)間依賴性和濃度依賴性，符合酶促動(dòng)力學(xué)特征。CYP3A被抑制后，酒石酸泰萬(wàn)菌素代謝消除顯著減慢。Caco-2細(xì)胞中，轉(zhuǎn)運(yùn)呈現(xiàn)細(xì)胞旁轉(zhuǎn)運(yùn)扣跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)并存;EGTA的存在會(huì)使轉(zhuǎn)運(yùn)系數(shù)增加;存在P-gp介導(dǎo)的外排現(xiàn)象。而在小腸灌流過(guò)程中，十二

7、指腸吸收迅速，是主要吸收腸段，吸收方式以跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)為主;EGTA的存在難以提高吸收效率，維拉帕米的存在可以顯著降低P-gp介導(dǎo)的外排;各腸段的轉(zhuǎn)運(yùn)系數(shù)說(shuō)明在十二指腸吸收良好，空腸和回腸的吸收較差。結(jié)果表明，CYP3A參與了酒石酸泰萬(wàn)菌素的代謝消除，由它引起的首過(guò)效應(yīng)會(huì)使酒石酸泰萬(wàn)菌素的口服生物利用度降低，另外，腸道的吸收不良、P-gp介導(dǎo)的外排及在腸系膜中的代謝也是酒石酸泰萬(wàn)菌素口服生物利用度低的原因。
　　4.CYP3A以及P-

8、gp對(duì)酒石酸泰萬(wàn)菌素在AA肉雞體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)影響
　　1日齡的AA肉雞飼喂至42日齡后，挑選60只健康雄性肉雞，隨機(jī)分為酮康唑處理組、維拉帕米處理組以及對(duì)照組，每組20只。酮康唑處理組按照60 mg·kg-1.b.w的劑量給動(dòng)物灌服酮康唑，1天1次，第3天灌藥0.5h后，按10 mg·kg-1.b.w灌服和靜注酒石酸泰萬(wàn)菌素溶液;其它兩組分別連續(xù)灌服9 mg·kg-1.b.w的維拉帕米和相同體積的生理鹽水，第3天灌藥0.5 h后，按

9、10 mg·kg-1.b.w灌服和靜注酒石酸泰萬(wàn)菌素溶液。給藥后24 h內(nèi)，翅下靜脈采血，用HPLC法測(cè)定酒石酸泰萬(wàn)菌素血藥濃度，用3P97藥動(dòng)學(xué)軟件分析藥-時(shí)數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，肉雞以單劑量口服和靜注酒石酸泰萬(wàn)菌素的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程符合二室開(kāi)放動(dòng)力學(xué)模型。口服給藥后對(duì)照組的藥-時(shí)曲線下面積(AUC)為0.96μg·mL-1·h，表觀清除率（CL/F)為15.3 L·kg-1·h-1;肉雞體內(nèi)CYP3A活性被酮康唑特異性抑制后，血漿中泰萬(wàn)菌素的藥