基于雙載模式的聚合物膠束用于多西他賽的pH敏感遞送.pdf

1、近年來癌癥的早期診斷技術(shù)和治療干預技術(shù)迅速發(fā)展，然而癌癥仍是威脅人類生命健康的重大疾病，癌癥治療是最具挑戰(zhàn)性的全球問題之一。化療是治療癌癥的重要手段，尤其對不能接受局部治療（手術(shù)或放療）的腫瘤或轉(zhuǎn)移性腫瘤療效較好。然而，由于化療藥物在全身非選擇性分布，癌癥病人接受化療的同時正常組織會受到不同程度損傷，造成不可避免的毒副作用。
　　聚合物膠束是一種由兩親性嵌段共聚物在水中自組裝形成的具有核殼結(jié)構(gòu)的納米遞送載體。作為新型納米給藥系統(tǒng)，

2、聚合物膠束可增加難溶性藥物的溶解度;降低血漿蛋白的吸附，穩(wěn)定遞送藥物，增加血液循環(huán)時間;納米級粒徑(＜200nm)有助于其利用EPR效應蓄積到腫瘤組織，降低對正常組織的毒性。自19世紀90年代以來，聚合物膠束被廣泛用于遞送抗腫瘤藥物的研究中。2007年，PEG-PLA包載紫杉醇的膠束(Genexol-PM(R))在韓國上市，用于復發(fā)性或轉(zhuǎn)移性乳腺癌和非小細胞肺癌的治療。臨床結(jié)果顯示，與泰素(Taxol(R))相比，Genexol-PM(

3、R)在腫瘤組織有明顯蓄積，治療效果更強，并且沒有過敏反應和明顯的組織毒性出現(xiàn)。
　　聚合物膠束的載藥方式分為兩種:物理包裹和化學結(jié)合。物理包裹方法制備過程簡單，條件簡單易控;然而通過此方法制備的膠束載藥量低且體循環(huán)過程中藥物易突釋?；瘜W結(jié)合法制備的膠束在血液循環(huán)中藥物不易突釋，載藥量可通過調(diào)節(jié)反應物比例得到控制;然而，由于藥物與載體通過較穩(wěn)定的化學鍵連接，膠束到達靶組織后藥物不易釋放，療效降低。
　　本課題采用課題組前期制備

4、的兩種pH敏感結(jié)合物普朗尼克Pluronic P123-單腙鍵-多西他賽(P123-single-hydrazone-Docetaxel，P123-s-hyd-DTX)和普朗尼克Pluronic P123-雙腙鍵-多西他賽(P123-double-hydrazone-Docetaxel，P123-d-hyd-DTX)作為載體材料，進一步物理包封多西他賽(Docetaxel，DTX)，使用化學結(jié)合與物理包裹的雙載策略制備聚合物膠束P123

5、-s-hyd-DTX/DTX和 P123-d-hyd-DTX/DTX。與單用化學結(jié)合或物理包裹方式載藥相比，雙載策略不僅能提高膠束載藥量，還能控制藥物的釋放，即包封的藥物首先釋放以達到治療濃度，化學結(jié)合的藥物緩慢釋放以維持有效的治療濃度。本課題制備雙載型膠束所用的兩種結(jié)合物材料均具有pH敏感性，當兩種膠束在血液循環(huán)(pH7.4)時藥物不易釋放，而通過EPR效應蓄積到腫瘤組織時，在弱酸性環(huán)境中腙鍵響應性斷裂，膠束解聚，藥物釋放。
　

6、　本課題主要內(nèi)容包括三部分:(1)多西他賽體外含量測定方法的建立;(2)P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的制備與理化性質(zhì)表征;(3)P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的體內(nèi)外評價。主要研究方法和結(jié)果如下:
　　1多西他賽體外含量測定方法的建立
　　本課題采用紫外-可見分光光度法建立了DTX的體外含量測定方法，建立了標準曲線并對日

7、內(nèi)日間精密度、方法回收率、加樣回收率進行了考察，結(jié)果顯示DTX濃度在5～40μg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好，精密度、回收率均符合分析要求，能夠滿足DTX體外含量測定要求。
　　2 P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的制備與理化性質(zhì)表征
　　本課題選擇薄膜水化法制備了膠束，以結(jié)合物的質(zhì)量、投藥量、水化體積、水化時間、水化溫度為因素進行單因素考察，而后選擇對包封率影響較大的因

8、素設計正交實驗篩選最優(yōu)處方與工藝。以最優(yōu)工藝處方分別制備三批P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束，對膠束的微觀形態(tài)、粒徑分布及Zeta電位進行了表征，并測定了膠束的包封率及載藥量，用動態(tài)光散射粒徑儀測定兩種膠束在血漿中粒徑的變化，從而考察了膠束的血漿穩(wěn)定性。
　　實驗結(jié)果表明，本課題制備的兩種膠束粒子形態(tài)圓整，大小均勻無明顯黏連;P123-s-hyd-DTX/DTX膠束的粒徑為(121

9、.63±3.72) nm，PDI=0.32,Zeta電位為(-7.50±0.55) mV，包封率為(88.30±2.11)％，載藥量為（14.87±0.10）％;P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的粒徑為(110.37±9.03) nm，PDI=0.39,Zeta電位為(-4.27±0.34) mV，包封率為(83.06±2.73)％，載藥量為(12.64±0.12)％;血漿穩(wěn)定性實驗表明兩種膠束在實驗條件下可維持穩(wěn)定達12h。<

10、br>　　3 P123-s-hyd-DTX/DTX膠束和P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的體內(nèi)外評價
　　本課題采用動態(tài)膜透析法考察了兩種聚合物膠束的pH敏感性，并比較含單腙鍵膠束和含雙腙鍵膠束的釋藥行為。以B16F10黑色素瘤細胞為模型細胞，利用MTT法對載體材料Pluronic P123及兩種聚合物膠束進行了評價，并與游離藥比較。給雌性昆明小鼠接種B16F10黑色素瘤細胞，選用造模成功的小鼠評價了兩種聚合物膠束的體內(nèi)抗

11、腫瘤效果，并與上市多西他賽注射液比較;對腫瘤組織進行HE染色，觀察各給藥組腫瘤組織的變化。本課題最后對兩種聚合物膠束的體外溶血性進行了考察;體內(nèi)藥效試驗結(jié)束后對各組小鼠正常器官組織進行HE染色，觀察了各組織的生理變化。
　　實驗結(jié)果表明，兩種膠束均具有明顯的pH敏感釋藥特性。在pH6.5條件下，P123-d-hyd-DTX/DTX膠束的累積釋放量遠大于P123-s-hyd-DTX/DTX膠束，說明P123-d-hyd-DTX/DT

12、X膠束具有較高的pH響應性。MTT實驗中兩種膠束都表現(xiàn)出濃度依賴性細胞毒作用。較低濃度時，游離DTX的細胞毒性高于兩種膠束(p＜0.05);隨著藥物濃度增加，兩種膠束顯示與游離DTX相當?shù)募毎拘?。體內(nèi)抗腫瘤活性研究中，與生理鹽水相比，兩種膠束能夠顯著抑制腫瘤的生長(p＜0.01），且小鼠體重沒有明顯下降(p＜0.01)。腫瘤組織HE染色結(jié)果表明相比于生理鹽水，多西他賽注射液和膠束均能明顯破壞腫瘤細胞的結(jié)構(gòu)，且兩種膠束的抑瘤效果更明顯。