2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、兔出血癥(Rabbit hemorrhagic disease,RHD)俗稱兔瘟,是由兔出血癥病毒(Rabbithaemorrhagic disease virus,RHDV)引起的一種高傳染性,高致死性的急性烈性傳染病,給養(yǎng)兔業(yè)和相關(guān)行業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。RHDV屬于杯狀病毒科(Caliciviridae)兔病毒屬(Lagovirus),為單股正鏈RNA病毒,含有1條約7.4 kb的基因組和1條約2.2 kb的亞基因組。VP60是

2、RHDV的主要結(jié)構(gòu)蛋白,是病毒的免疫保護性抗原,是RHD診斷和疫苗研發(fā)的重要分子。
  RHD無有效的治療手段,目前控制的主要措施為疫苗免疫預(yù)防。為了更好地控制和預(yù)防兔出血癥,本論文從RHDV的檢測和RHD基因工程疫苗的免疫保護機制兩方面進行研究。根據(jù)VP60蛋白基因序列設(shè)計引物建立兔出血癥病毒SYBR GreenRT-PCR檢測方法,利用該方法對不同時間點不同樣品中病毒含量的動態(tài)變化進行分析;另外從體液免疫應(yīng)答和細胞免疫應(yīng)答兩方

3、面評估兔出血癥基因工程疫苗的免疫保護機制。主要研究內(nèi)容如下:
  1.兔出血癥病毒SYBR Green RT-PCR檢測方法的建立及應(yīng)用
  根據(jù)兔出血癥病毒的VP60蛋白基因序列設(shè)計引物,經(jīng)過反應(yīng)體系和反應(yīng)條件的摸索和優(yōu)化,建立了重復(fù)性好、敏感性強的RHDV SYBR Green RT-PCR檢測方法,可有效檢出重組質(zhì)粒為14.6拷貝/μL的樣品。利用該方法對RHDV感染兔6h、12h、24 h、30h、36h的血清、肝、

4、脾中的病毒含量動態(tài)變化進行檢測。結(jié)果表明,血清、肝、脾三種樣品中病毒含量均呈現(xiàn)時間依賴效應(yīng),隨著時間增加,其病毒含量呈現(xiàn)幾何數(shù)增長。家兔感染RHDV12h、24h、30h及36h后,血清中病毒含量分別達到約105、106、107、108拷貝數(shù);肝臟中病毒分別達到約105、108、108、109拷貝數(shù);脾臟中病毒含量分別達到約105、108、108、108拷貝數(shù)左右;肝臟中的RHDV含量最高,說明肝臟是其主要的靶組織。
  2.兔出

5、血癥基因工程疫苗免疫保護機制的研究
  為研究兔出血癥基因工程疫苗的免疫保護機制,以兔出血癥基因工程疫苗免疫健康易感家兔,同時設(shè)立組織滅活疫苗免疫組和PBS空白對照組,從體液免疫應(yīng)答和細胞免疫應(yīng)答兩個方面評估疫苗的免疫效力。分別在免疫接種后0、3、7、14、21、28 d采集各組兔血液,通過ELISA方法檢測血清中RHDV特異性抗體IgG和IgM水平以及細胞因子白細胞介素-2(IL-2)、白細胞介素-4(IL-4)、干擾素-γ(I

6、FN-γ)的水平變化;用血凝抑制(HI)檢測血液中總抗體的水平變化,于21d對所有試驗動物攻毒,以攻毒保護試驗評估疫苗的免疫保護能力。試驗結(jié)果表明,免疫后7天、14天和21天,組織滅活疫苗組和基因工程疫苗組血清中特異性抗體IgG、IgM均顯著升高,與對照組相比差異顯著(P<0.05);基因工程疫苗組與對照組相比,免疫后3天、7天和14天血清中IL-2、IL-4和IFN-γ含量均顯著(P<0.05)增高,組織滅活疫苗組與對照組相比,血清I

7、L-2含量無顯著(P>0.05)差異,IL-4和IFN-γ含量顯著(P<0.05)升高;與對照組相比,免疫后7天、14天、21天兩組疫苗組血清的血凝抑制效價均顯著升高(P<0.05);同時還發(fā)現(xiàn),基因工程疫苗組誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異性抗體(IgG、IgM)、細胞因子(IL-4、IFN-γ)均比組織滅活苗組高,且免疫后3天、7天、14天、21天以及28天基因工程疫苗組血清中IL-2顯著(P<0.05)高于組織滅活苗組;攻毒保護試驗結(jié)果顯示,兩種疫

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