產(chǎn)γ-氨基丁酸益生菌的篩選及對(duì)小鼠微生態(tài)效應(yīng)的影響研究.pdf_第1頁(yè)
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1、本研究為篩選具有生物拮抗活性和耐酸耐膽鹽能力的高產(chǎn)γ-氨基丁酸(GABA)的益生菌菌株,并探討其微生態(tài)效應(yīng)。從待分離樣品中篩選出可疑菌株,經(jīng)紙層析和HPLC-MS進(jìn)行定性和定量分析,篩選出一株高產(chǎn)GABA菌株;通過小鼠飼喂試驗(yàn)研究該高產(chǎn)GABA菌株對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能、血清抗氧化能力、免疫器官指數(shù)、脾淋巴細(xì)胞增殖、盲腸菌群以及空腸和十二指腸黏膜的影響。試驗(yàn)結(jié)果如下:
  1.通過細(xì)菌形態(tài)、生理生化特性并結(jié)合細(xì)菌16S rDNA序列分析對(duì)

2、高產(chǎn)菌株進(jìn)行鑒定,同時(shí)研究高產(chǎn)菌株對(duì)3種動(dòng)物性病原菌的生物拮抗作用及其耐酸耐膽鹽試驗(yàn)。結(jié)果,從泡菜中篩選出的菌株GA8為高產(chǎn)γ-氨基丁酸菌株,在含有1%L-谷氨酸鈉的GYP培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)48 h,產(chǎn)GABA量達(dá)3.50 g·L-1,經(jīng)鑒定該菌株為植物乳桿菌;該菌株全菌液和上清液對(duì)雞源大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和雞白痢沙門氏菌有一定的抑制作用,其菌體懸液無(wú)抑菌能力;該菌初始活菌數(shù)為108 CFU·mL-1時(shí),在pH=2.0的酸性環(huán)境中處

3、理4h后活菌數(shù)能達(dá)到106 CFU·mL-1以上;0.3%膽鹽濃度處理4h,活菌數(shù)達(dá)到103 CFU·mL-1左右。表明所篩選出的產(chǎn)γ-氨基丁酸菌株GA8具有一定的抑菌性能和耐酸能力,0.1%膽鹽濃度下有較強(qiáng)的存活率。
  2.60只昆明系雌性小鼠隨機(jī)分成5組,試驗(yàn)1、2、3組小鼠飲用水中分別添加含有1×106 CFU mL-1,2×106 CFU mL-1,4×106 CFU mL-1的產(chǎn)GABA植物乳桿菌GA8,對(duì)照組在飲用水

4、和日糧中不添加任何制劑,GABA組在日糧中加入15 ppm GABA,小鼠飼喂30 d后,檢測(cè)其生長(zhǎng)性能、血清抗氧化能力、免疫器官指數(shù)、脾淋巴細(xì)胞增殖、盲腸菌群結(jié)構(gòu)以及空腸和十二指腸黏膜結(jié)構(gòu)。結(jié)果:(1)飼喂產(chǎn)GABA植物乳桿菌GA8后,試驗(yàn)1、2、3組、GABA組的末重分別比對(duì)照組提高了2.10%、0.86%、5.55%、4.48%,平均日增重分別提高了10.71%、7.14%、17.86%、10.71%,其中僅試驗(yàn)3組與對(duì)照組差異顯

5、著(P<0.05);試驗(yàn)1、2、3組、GABA組的料重比分別比對(duì)照組降低了6.93%、5.66%、11.10%、10.68%(P>0.05)。(2)與對(duì)照組相比,試驗(yàn)1、2、3組的總抗氧化能力(T-AOC)分別提高了6.04%、30.97%、31.11%,總超氧化物歧化分別提高了4.94%、6.13%、5.23%,丙二醛(MDA)分別降低了11.32%、9.16%、7.63%,但差異均不顯著(P>0.05)。(3)試驗(yàn)1、2、3組小鼠盲

6、腸大腸桿菌顯著或極顯著低于對(duì)照組和GABA組(P<0.05或P<0.01);試驗(yàn)1、2、3組、GABA組的乳桿菌比對(duì)照組分別增加了1.16%、0.91%、1.68%、0.52%,試驗(yàn)3組與對(duì)照組差異顯著(P<0.05);試驗(yàn)1、2組的腸球菌顯著低于對(duì)照組(P<0.05),試驗(yàn)2組顯著低于GABA組(P<0.05);采用PCR-DGGE技術(shù)分析,試驗(yàn)1、2、3組和GABA組腸道菌群的多樣性指數(shù)、均勻度和豐富度均高于對(duì)照組。(4)試驗(yàn)1、2

7、、3組和GABA組的各免疫器官指數(shù)表現(xiàn)出了一定的優(yōu)勢(shì),胸腺指數(shù)分別提高了19.25%、6.28%、16.74%、1.26%,試驗(yàn)1組與對(duì)照組、GABA組差異均顯著(P<0.05),其余各組無(wú)明顯差異;試驗(yàn)1、2、3組和GABA組的脾臟指數(shù)分別提高了10.71%、12.01%、10.39%、9.09%,各組間無(wú)明顯差異(P>0.05)。(5)飼喂產(chǎn)GABA植物乳桿菌后小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率增高,試驗(yàn)1、2、3組與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0

8、.01);GABA組與對(duì)照組差異顯著(P<0.05);試驗(yàn)1組與試驗(yàn)2組、GABA組差異顯著(P<0.05);試驗(yàn)3組與GABA組差異極顯著(P<0.01)。(6)十二指腸絨毛長(zhǎng)度明顯增加,試驗(yàn)1、2、3組、GABA組都與對(duì)照組差異極顯著(P<0.01),其中試驗(yàn)1組與試驗(yàn)3組差異顯著(P<0.05),試驗(yàn)3組與試驗(yàn)2組和GABA組差異極顯著(P<0.01);十二指腸隱窩深度降低,但差異不明顯(P>0.05);試驗(yàn)1、2、3組和GABA

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