產(chǎn)γ-氨基丁酸益生菌的篩選及對(duì)小鼠微生態(tài)效應(yīng)的影響研究.pdf

1、本研究為篩選具有生物拮抗活性和耐酸耐膽鹽能力的高產(chǎn)γ-氨基丁酸(GABA)的益生菌菌株，并探討其微生態(tài)效應(yīng)。從待分離樣品中篩選出可疑菌株，經(jīng)紙層析和HPLC-MS進(jìn)行定性和定量分析，篩選出一株高產(chǎn)GABA菌株;通過(guò)小鼠飼喂試驗(yàn)研究該高產(chǎn)GABA菌株對(duì)小鼠生長(zhǎng)性能、血清抗氧化能力、免疫器官指數(shù)、脾淋巴細(xì)胞增殖、盲腸菌群以及空腸和十二指腸黏膜的影響。試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.通過(guò)細(xì)菌形態(tài)、生理生化特性并結(jié)合細(xì)菌16S rDNA序列分析對(duì)

2、高產(chǎn)菌株進(jìn)行鑒定，同時(shí)研究高產(chǎn)菌株對(duì)3種動(dòng)物性病原菌的生物拮抗作用及其耐酸耐膽鹽試驗(yàn)。結(jié)果，從泡菜中篩選出的菌株GA8為高產(chǎn)γ-氨基丁酸菌株，在含有1％L-谷氨酸鈉的GYP培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)48 h，產(chǎn)GABA量達(dá)3.50 g·L-1，經(jīng)鑒定該菌株為植物乳桿菌;該菌株全菌液和上清液對(duì)雞源大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和雞白痢沙門氏菌有一定的抑制作用，其菌體懸液無(wú)抑菌能力;該菌初始活菌數(shù)為108 CFU·mL-1時(shí)，在pH=2.0的酸性環(huán)境中處

3、理4h后活菌數(shù)能達(dá)到106 CFU·mL-1以上;0.3％膽鹽濃度處理4h，活菌數(shù)達(dá)到103 CFU·mL-1左右。表明所篩選出的產(chǎn)γ-氨基丁酸菌株GA8具有一定的抑菌性能和耐酸能力，0.1％膽鹽濃度下有較強(qiáng)的存活率。
　　2.60只昆明系雌性小鼠隨機(jī)分成5組，試驗(yàn)1、2、3組小鼠飲用水中分別添加含有1×106 CFU mL-1，2×106 CFU mL-1，4×106 CFU mL-1的產(chǎn)GABA植物乳桿菌GA8，對(duì)照組在飲用水

4、和日糧中不添加任何制劑，GABA組在日糧中加入15 ppm GABA，小鼠飼喂30 d后，檢測(cè)其生長(zhǎng)性能、血清抗氧化能力、免疫器官指數(shù)、脾淋巴細(xì)胞增殖、盲腸菌群結(jié)構(gòu)以及空腸和十二指腸黏膜結(jié)構(gòu)。結(jié)果:(1)飼喂產(chǎn)GABA植物乳桿菌GA8后，試驗(yàn)1、2、3組、GABA組的末重分別比對(duì)照組提高了2.10％、0.86％、5.55％、4.48％，平均日增重分別提高了10.71％、7.14％、17.86％、10.71％，其中僅試驗(yàn)3組與對(duì)照組差異顯

5、著(P＜0.05);試驗(yàn)1、2、3組、GABA組的料重比分別比對(duì)照組降低了6.93％、5.66％、11.10％、10.68％（P＞0.05）。(2)與對(duì)照組相比，試驗(yàn)1、2、3組的總抗氧化能力(T-AOC)分別提高了6.04％、30.97％、31.11％，總超氧化物歧化分別提高了4.94％、6.13％、5.23％，丙二醛(MDA)分別降低了11.32％、9.16％、7.63％，但差異均不顯著(P＞0.05)。(3)試驗(yàn)1、2、3組小鼠盲

6、腸大腸桿菌顯著或極顯著低于對(duì)照組和GABA組(P＜0.05或P＜0.01);試驗(yàn)1、2、3組、GABA組的乳桿菌比對(duì)照組分別增加了1.16％、0.91％、1.68％、0.52％，試驗(yàn)3組與對(duì)照組差異顯著(P＜0.05);試驗(yàn)1、2組的腸球菌顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)，試驗(yàn)2組顯著低于GABA組（P＜0.05）;采用PCR-DGGE技術(shù)分析，試驗(yàn)1、2、3組和GABA組腸道菌群的多樣性指數(shù)、均勻度和豐富度均高于對(duì)照組。(4)試驗(yàn)1、2

7、、3組和GABA組的各免疫器官指數(shù)表現(xiàn)出了一定的優(yōu)勢(shì)，胸腺指數(shù)分別提高了19.25％、6.28％、16.74％、1.26％，試驗(yàn)1組與對(duì)照組、GABA組差異均顯著(P＜0.05)，其余各組無(wú)明顯差異;試驗(yàn)1、2、3組和GABA組的脾臟指數(shù)分別提高了10.71％、12.01％、10.39％、9.09％，各組間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。(5)飼喂產(chǎn)GABA植物乳桿菌后小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率增高，試驗(yàn)1、2、3組與對(duì)照組相比差異極顯著（P＜0

8、.01）;GABA組與對(duì)照組差異顯著(P＜0.05);試驗(yàn)1組與試驗(yàn)2組、GABA組差異顯著(P＜0.05);試驗(yàn)3組與GABA組差異極顯著(P＜0.01)。(6)十二指腸絨毛長(zhǎng)度明顯增加，試驗(yàn)1、2、3組、GABA組都與對(duì)照組差異極顯著（P＜0.01），其中試驗(yàn)1組與試驗(yàn)3組差異顯著(P＜0.05)，試驗(yàn)3組與試驗(yàn)2組和GABA組差異極顯著（P＜0.01）;十二指腸隱窩深度降低，但差異不明顯（P＞0.05）;試驗(yàn)1、2、3組和GABA