骨髓參與哮喘發(fā)病機(jī)制的實驗研究.pdf

1、目的： 研究骨髓參與哮喘發(fā)病的機(jī)制，分析小鼠在致敏和哮喘狀態(tài)下骨髓中CD34陽性(CD<,34><'+>)細(xì)胞、外周血中CD<,34><'+>細(xì)胞和肺組織中CD<,34><'+>細(xì)胞的表達(dá)情況，以及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)、血清和骨髓中白細(xì)胞介素5(interleukin-5，IL-5)水平的變化，觀察骨髓在哮喘發(fā)病中的作用。 方法： 健康雄性昆明小鼠(體重

2、8-22g)隨機(jī)分成三組，每組10只。①哮喘組：用10μg卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)和10mg氫氧化鋁腹腔注射進(jìn)行致敏，1％OVA霧化吸入激發(fā)建立小鼠哮喘模型。②致敏組：上述方法致敏后，予以生理鹽水(normalsaline,NS)霧化吸入。③正常對照組：予同等劑量的NS進(jìn)行腹腔注射和霧化吸入。末次激發(fā)后24h取材，肺組織切片HE染色觀察病理學(xué)改變并進(jìn)行嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophils，EOS)計數(shù)，檢測外周血中EOS數(shù)

3、；流式細(xì)胞儀檢測骨髓和外周血中CD34+細(xì)胞比例；免疫組織化學(xué)法測定肺組織中CD<,34><'+>細(xì)胞的表達(dá)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme．Linked Immunosorbent Assay,ELISA)檢測BALF、血清和骨髓中的IL-5水平。 結(jié)果： 1．哮喘組小鼠肺組織中EOS計數(shù)和外周血中EOS比例均較正常對照組增高。與正常對照組小鼠相比，致敏組小鼠骨髓中CD34+細(xì)胞比例出現(xiàn)增高，哮喘組小鼠中其進(jìn)一步增高。

4、肺組織中EOS數(shù)與外周血中EOS比例、骨髓中CD<,34><'+>細(xì)胞比例具有正相關(guān)性。 2．哮喘組小鼠外周血中CD<,34><'+>細(xì)胞比例較致敏組、正常對照組增高，其肺組織中CD<,34><'+>細(xì)胞表達(dá)也較這兩組增多。 3．哮喘組小鼠BALF中IL-5的水平較致敏組、正常對照組增高，而致敏組小鼠BALF中IL-5與正常對照組相比未見明顯增高。與正常對照組相比，致敏組小鼠血清IL-5水平增高，哮喘組小鼠中進(jìn)一步增高。

5、ELISA法可檢測到致敏組、哮喘組和正常對照組小鼠骨髓中的IL-5，但三組間比較差異無顯著性。 結(jié)論： 1．骨髓參與了哮喘的發(fā)病過程。小鼠骨髓中造血祖細(xì)胞在致敏和哮喘狀態(tài)下都出現(xiàn)了不同程度的增殖。肺組織內(nèi)EOS的多少與外周血中EOS比例、骨髓中CD<,34><'+>細(xì)胞比例有關(guān)，成正相關(guān)性。 2．小鼠在哮喘狀態(tài)下外周血和肺組織中CD<,34><'+>細(xì)胞表達(dá)增多。哮喘時骨髓中的造血祖細(xì)胞可能向外周遷移至局部的氣道