早期腸內(nèi)營養(yǎng)在大鼠急性重癥胰腺炎腸道免疫屏障中的作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、 目的：通過檢測早期腸內(nèi)營養(yǎng)對牛黃膽酸鈉誘導(dǎo)大鼠重癥急性胰腺炎模型的血清淀粉酶(AMY)、血糖(GLU)、靜脈血中內(nèi)毒素的含量,末段回腸和結(jié)腸 peyer 結(jié) MAdcAM-1 分子(mucosal addressin cell adhesion molecule-1)CD4+、CD8+含量。和大鼠門靜脈血、胰腺、肺臟、腸系膜淋巴結(jié)的細(xì)菌培養(yǎng)。以及大鼠腸道的TLR4表達(dá),觀察早期腸內(nèi)營養(yǎng)在大鼠重癥急性胰腺炎腸道免疫屏障里的功能和研究E

2、EN功效原理。方法：把成年身體狀況良好的60只雄性大鼠體重約為300克左右,隨機(jī)分成三組,每組20只大鼠。即假手術(shù)組(SO組)：開腹后僅輕輕翻動十二指腸及胰腺組織后關(guān)腹,不作處理。將 3.8%?；悄懰徕clml從大鼠胰腺被膜下各點(diǎn)徐徐勻速注入胰腺從而完成動物模型建立。造模成功后按組分別給予腸外營養(yǎng)和腸內(nèi)營養(yǎng)。腸外營養(yǎng)組(TPN 組),造模后 12 小時,經(jīng)頸外靜脈置管輸注腸外營養(yǎng)液。腸內(nèi)營養(yǎng)組(EEN 組),造模 12 小時后,經(jīng)胃,空腸

3、做空腸造瘺管,予以腸內(nèi)營養(yǎng)。各組于造模后一天,經(jīng)SD大鼠頸靜脈取血,檢測血清淀粉酶(AMY)、血糖(GLU)水平。腸外營養(yǎng)、腸內(nèi)營養(yǎng)持續(xù)給予五天,第六天兩組分別統(tǒng)計SD大鼠死亡率,隨即處死大鼠并收集標(biāo)本,胰腺組織HE染色后行光鏡病理學(xué)檢查?？漳c、回腸、結(jié)腸HE染色后觀察腸粘膜形態(tài)學(xué)。免疫組化法測定末端回腸和 Peyer 結(jié)腸道的MAdcAM-1、CD4+、CD8+的含量。Westen blot法測定SD大鼠腸道組織 TLR4 的表達(dá)。S

4、D大鼠靜脈血檢測內(nèi)毒素含量。取SD大鼠門靜脈血、胰腺、肺臟、腸系膜淋巴結(jié)做細(xì)菌培養(yǎng),檢測細(xì)菌移位率。此課題為四川省綿陽市中心醫(yī)院趙平武教授申請的四川省應(yīng)用基礎(chǔ)研究的課題。結(jié)果：(1)各組SD大鼠5天的生存率：假手術(shù)組(SO組)SD大鼠全部存活生存率是 100%,死亡率為零；腸外營養(yǎng)組(TPN 組)5天死亡率為50%,早期腸內(nèi)營養(yǎng)組(EEN組)5天死亡率為25%,S組和其它實(shí)驗(yàn)組的死亡率的對照存在明顯差異(P<0.01)。TPN和EEN組

5、的死亡率對照無明顯差異無統(tǒng)計學(xué)意 義(P=0.0847)。證明 EEN是安全可行的。(2)SAP下SD大鼠血清淀粉酶改變：TPN、EEN組血淀粉酶含量在建模 24 小時后都明顯上升,與 SO 組對照有明顯差異(P<0.01)。在建模24小時后,EEN組和TPN對照,血清淀粉酶含量降低,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。(3)血糖變化：造模后TPN、EEN組血糖水平在建模24 小時后均顯著升高,與 SO組比較有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)

6、；在建模24小時后,EEN組與TPN組比,血糖含量無明顯變化,但有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。(5)胰腺組織學(xué)評分：TPN、EEN組建模5天后所采集標(biāo)本組織學(xué)評分與SO組相比,均明顯升高。與S組比較有顯著差異性(P<0.01)。而TPN、EEN組相比,TPN組評分高于EEN組而且有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。(6)各組SD大鼠靜脈血內(nèi)毒素含量測定：本實(shí)驗(yàn)中EEN、TPN兩組動物在建立SAP模型5天后血內(nèi)毒素水平明顯比SO組升高

7、,說明EEN、TPN兩組均有不同程度的腸道屏障損傷,而EEN組血漿內(nèi)毒素含量與TPN組對比明顯偏低,具有統(tǒng)計學(xué)意義,(P<0.05)。說明SAP早期腸內(nèi)營養(yǎng)有效降低了SD大鼠SAP時腸粘膜的通透性,有效保護(hù)了其腸粘膜屏障。(7)胰腺、肺臟、腸系膜淋巴結(jié)細(xì)菌培養(yǎng)和細(xì)菌易位率測定：細(xì)菌類型主要為革蘭陰性菌,其中大腸桿菌占85.7%(1 2/1 4)。各種細(xì)菌易位率EEN組遠(yuǎn)低于TPN組,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。而EEN、TPN組與

8、SO 組相比細(xì)菌移位率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于后者,具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義P<0.01.(8)末端回腸黏膜和Peyer結(jié)CD4+、CD8+、MadcAM-1,免疫組化測定：CD4+、CD8+、MadcAM-1 在 EEN、TPN 組表達(dá)均低于SO組(P<0.05),其中TPN組低于EEN組(p<0.05)(9)回腸黏膜光鏡下改變：在第5d時,TPN組腸粘膜萎縮程度包括黏膜厚度、絨毛長度與EEN組對照,腸粘膜萎縮程度明顯加重,有顯著性差異(p<0.01)。(

9、10)Westen blot法測定SD大鼠腸道組織TLR4的表達(dá)：光密度掃描分析顯示,EEN、TPN組與SO組相比腸組織TLR4表達(dá)增強(qiáng)(P<0.01)。EEN組與TPN組相比,腸組織TLR4表達(dá)減弱(P<0.01)。結(jié)論：(1)將3.8%牛磺膽酸鈉lml緩慢勻速注入SD大鼠胰腺被膜下,能建立SAP動物模型。它具有重復(fù)性好,操作簡便,價格便宜的優(yōu)點(diǎn)。而且SD大鼠 SAP動物模型病情呈漸進(jìn)性發(fā)展。和患者 SAP的疾病演變過程十分相像。5d

10、死亡率穩(wěn)定。完全能夠滿足SAP的早期腸內(nèi)營養(yǎng)治療研究。(2)早期腸內(nèi)營養(yǎng)不加重胰腺炎病情,是安全、可行的,而且早期腸內(nèi)營養(yǎng)在維護(hù)重癥胰腺炎SD大鼠腸道屏障方面的作用效果顯著,對腸道屏障的化學(xué)、免疫、生物、機(jī)械的幾方面的功能提高幾乎均有效。尤其是EEN能增加MAdcAM-1、CD4+、CD8+表達(dá),提高 SAP 時腸免疫屏障,減少茵群易位,減少局部及全身感染?？梢蕴岣呒毙灾匕Y胰腺炎 SD 大鼠 5d 生存率。(3)研究成果預(yù)測,TLR4通