五谷蟲干粉對大鼠皮膚創(chuàng)面愈合及血管生成影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察五谷蟲干粉對大鼠創(chuàng)面愈合及創(chuàng)面血管生成的影響，并初步探討其與創(chuàng)面愈合之間的關(guān)系及可能的機(jī)制。
　　 方法：1．五谷蟲干粉的獲得：將產(chǎn)在魚目中的絲光綠蠅蟲卵浸入1％的亞硫酸鈉溶液、3%煤酚皂溶液消毒。在玻璃瓶進(jìn)行無菌飼養(yǎng)。取無菌飼養(yǎng)的3齡幼蟲先后放在3.5%甲醛生理鹽水溶液、2%雙氧水溶液、5%稀鹽酸溶液，對蟲體進(jìn)行消毒處理。將得到的無菌五谷蟲40℃烘干，機(jī)械粉碎，粉末于常溫干燥器保存。
　　 2．選擇健康雄性S

2、D大鼠48只，體重200-220克，經(jīng)10%水合氯醛腹腔內(nèi)麻醉后，常規(guī)背部備皮，碘伏消毒。在大鼠背部中線左右兩側(cè)對稱部位制作2個(gè)直徑1.5cm的圓形急性全層皮膚缺損創(chuàng)面模型。將創(chuàng)面隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（五谷蟲干粉組）和對照組。實(shí)驗(yàn)組大鼠創(chuàng)面應(yīng)用五谷蟲干粉0.3g后無菌包扎。對照組創(chuàng)面應(yīng)用凡士林0.3g。干粉或凡士林每隔一天更換一次，直到創(chuàng)面完全愈合。
　　 3．術(shù)后第1，3，7，10，14和21天，隨機(jī)選取8只大鼠被處死，分別測量實(shí)驗(yàn)

3、組和對照組的創(chuàng)面直徑并計(jì)算創(chuàng)面大小。根據(jù)公式：創(chuàng)面愈合率=（原始創(chuàng)面面積-未愈合創(chuàng)面面積）/原始創(chuàng)面面積×100%，計(jì)算兩組不同時(shí)間段的創(chuàng)面愈合率。
　　 4．在以上各時(shí)間點(diǎn)，分別切取兩組創(chuàng)面組織，做組織形態(tài)學(xué)（HE染色）觀察，評價(jià)實(shí)驗(yàn)組和對照組創(chuàng)面愈合情況。
　　 5．采用免疫組織化學(xué)觀察不同時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組和對照組創(chuàng)面血管內(nèi)皮生長因子(VEGFA)的表達(dá)情況。
　　 6．采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)

4、檢測不同時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組和對照組創(chuàng)面血管內(nèi)皮生長因子(VEGFA)mRNA的表達(dá)變化情況。
　　 7．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以X±S表示，使用SPSS13.0軟件包進(jìn)行單因素方差分析，以P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：1．術(shù)后第1、3和14天實(shí)驗(yàn)組和對照組創(chuàng)面愈合率無顯著性差異(P＞0.05)；第7和10天五谷蟲干粉組創(chuàng)面愈合率高于對照組，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著差異(P＜0.05)；至第21天，兩組創(chuàng)面都完全愈合。

5、>　　 2．組織學(xué)檢測結(jié)果：術(shù)后第1天，兩組創(chuàng)面炎癥反應(yīng)均為較明顯；第3天，可見新生肉芽組織、再生上皮及血管反應(yīng)；第7天，實(shí)驗(yàn)組與對照組比較，肉芽組織更成熟，術(shù)后14天，實(shí)驗(yàn)組與對照組比較，膠原纖維排列整齊，瘢痕窄，膠原內(nèi)可見再生的毛囊和皮脂腺。
　　 3．免疫組織化學(xué)觀察：術(shù)后在第1，3，7，10，14和21天，實(shí)驗(yàn)組和對照組均可見VEGFA的表達(dá)，并且二者隨著時(shí)間表達(dá)逐漸下降；在第3天實(shí)驗(yàn)組VEGFA的表達(dá)高于對照組(P＜

6、0.05)，其余時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組和對照組表達(dá)未見明顯差異(P＞0.05)。
　　 4.RT-PCR技術(shù)檢測結(jié)果：在第1，3，7，10，14和21天，實(shí)驗(yàn)組和對照組均可見VEGFA mRNA的表達(dá)，并且隨著時(shí)間表達(dá)逐漸下降；在第3天實(shí)驗(yàn)組VEGFA mRNA的表達(dá)高于對照組(P＜0.05)，其余時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組和對照組表達(dá)未見明顯差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：1.五谷蟲干粉可以提高大鼠背部皮膚創(chuàng)面愈合率，促進(jìn)創(chuàng)面愈合，提高創(chuàng)