山楂黃烷醇對大鼠離體胸主動脈環(huán)舒張作用研究.pdf

1、目的:對山楂黃烷醇的舒張血管作用進行系統(tǒng)的考察，以期發(fā)現(xiàn)其中內(nèi)皮依賴性舒張血管的具體成分，探索其構(gòu)效規(guī)律和作用機制，并為其在預(yù)防和治療心血管疾病方面的保健應(yīng)用提供參考。
　　方法:采用離體大鼠胸主動脈環(huán)張力試驗法，以累積加藥的方式，系統(tǒng)地考察山楂黃烷醇對去氧腎上腺素(PE)預(yù)收縮離體大鼠胸主動脈環(huán)的舒張作用，研究內(nèi)容包括:
　　1.采用內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮大鼠胸主動脈環(huán)兩種標(biāo)本，對山楂兩種不同工藝層次提取物山楂糖漿(HS)和山楂

2、黃烷醇(HF)粗提物的舒張血管作用進行內(nèi)皮依賴性的考察;
　　2.結(jié)合HPLC分析手段，對HF粗提物經(jīng)正相硅膠、Sephadex LH-20凝膠層析分離得到的兩組系列餾分進行血管舒張作用的檢索和分析;
　　3.對山楂黃烷醇EC、B2、B5、C1、C2、C3、D1純品及C1、D1的未完全純化物進行離體血管舒張作用考察;
　　4.觀察去內(nèi)皮或L-亞硝基精氨酸甲基酯(L-NAME)、亞甲藍(MB)、吲哚美辛(Indo)預(yù)處理

3、對D1未完全純化物內(nèi)皮依賴性舒張作用的影響。
　　采用GraphPad Prism5.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理。
　　結(jié)果:
　　1.HS和HF粗提物（在黃烷醇類物質(zhì)濃度約為14～140mg/L范圍內(nèi)）對PE預(yù)收縮的大鼠離體胸主動環(huán)均具有濃度依賴性的舒張作用。去除血管內(nèi)皮可以使HS的舒張血管作用明顯減弱，使HF粗提物的作用基本消除。
　　2.HF粗提物經(jīng)正相硅膠柱分離得到的6個餾分中，后期接收的第4、5、6餾分

4、產(chǎn)生了卓越的舒血管作用（質(zhì)量濃度3～20 mg/L濃度范圍內(nèi)）;Sephadex LH-20分離得到的6個餾分中，后期接收的第4餾分產(chǎn)生了相對卓越的舒血管作用（質(zhì)量濃度3～100mg/L濃度范圍內(nèi)）。結(jié)合HPLC分析，其有效成分可能是山楂黃烷醇聚合體或分離過程中的未知伴生物。
　　3.山楂黃烷醇EC、B2、B5、C1、C2、C3、D1純品具有溫和的舒張血管作用，其中，主成分的單體EC和二聚體B2、B5在1～100mg/L濃度范圍內(nèi)

5、基本無效應(yīng)，三聚體和四聚體則較為突出，在濃度30～300mg/L范圍內(nèi)可以產(chǎn)生舒張作用。7種HF的舒張作用因聚合度和鍵合方式不同而呈現(xiàn)差異，C1、D1較為突出;D1在17.3mg/L即表現(xiàn)出舒張作用，是引發(fā)血管舒張反應(yīng)最為靈敏的化合物，其最大舒張率達(65.1±2.8)％。
　　4.C1、D1未純化組分均具有內(nèi)皮依賴性血管舒張作用，且相比于C1、D1純化合物，誘發(fā)血管舒張的有效濃度明顯降低。D1未純化物的效應(yīng)比D1純化合物高近7倍

6、(EC50(Unpurified D1)=11.8mg/L，EC50(D1)=94.5mg/L)。L-NAME和MB預(yù)處理使D1未純化物的舒張效應(yīng)基本消除，而Indo對其影響并不顯著;L-NAME、MB、Indo對D1純化合物的舒張作用也產(chǎn)生了相同影響（數(shù)據(jù)未給出）。
　　結(jié)論:
　　1.離體試驗中，山楂黃烷醇粗提物確實具有內(nèi)皮依賴性血管舒張作用，并且其有效成分的作用機制很可能是通過作用于eNOS，進而誘發(fā)NO-cGMP途徑