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文檔簡介
1、乳酸菌是人體腸道內(nèi)的一大類正常菌群,是公認的安全的微生物。嗜熱鏈球菌能夠產(chǎn)生乳酸,屬于乳酸菌,是鏈球菌屬中唯一的益生菌。其產(chǎn)生的異型多糖具有多種生理功能,能夠增強人體免疫,可用于食品工業(yè)和醫(yī)藥等領(lǐng)域,具有潛在的開發(fā)價值,因而受到人們關(guān)注。但是胞外多糖的產(chǎn)量低,并且胞外多糖的分子量和化學組成不清楚,這是限制胞外多糖在工業(yè)中應(yīng)用的一個瓶頸。為了解決這個問題,人們做了大量的研究工作。在發(fā)酵工業(yè)中,提高微生物代謝產(chǎn)物產(chǎn)量和分析代謝產(chǎn)物的分子量及
2、化學組成的方法有多種,包括改變菌株的遺傳性狀、優(yōu)化微生物的發(fā)酵條件、優(yōu)化產(chǎn)物的提取條件、凝膠色譜法和三甲基硅烷化法等。
本文以嗜熱鏈球菌為材料,MRS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,優(yōu)化了嗜熱鏈球菌胞外多糖的提取工藝條件,對得到的粗多糖用DEAE-Cellulose離子交換柱進行了分離,并且采用SephadexG-100柱層析和氣相色譜對純化的多糖的分子量和結(jié)構(gòu)進行了初步研究。
采用酶法、TCA法、sevag法、酶+TCA法、酶
3、+sevag法、TCA+sevag法、酶+TCA+sevag法研究對嗜熱鏈球菌胞外多糖去蛋白的影響,結(jié)果表明酶+sevag法為最佳去蛋白法。
通過單因素試驗選取乙醇濃度、多糖溶液pH值、醇沉溫度3因素的水平,采用3因素3水平Box-Behnken統(tǒng)計學實驗設(shè)計方法,進行響應(yīng)面回歸分析,以脫蛋白的純多糖為響應(yīng)值,確定了胞外多糖提取工藝中各影響因素的最優(yōu)條件并得到回歸模型。顯著性分析結(jié)果表明:回歸模型較好地反映了胞外多糖提取量與乙
4、醇濃度、多糖溶液pH值、醇沉溫度的關(guān)系;最優(yōu)工藝條件為在乙醇濃度為90%、多糖溶液pH值為6、醇沉溫度為15℃時,胞外多糖提取量為2.9005g/L。回歸模型的預(yù)測值與實測值的相對誤差在2.4%左右,表明回歸方程與實際情況擬合較好。
對得到的粗多糖用DEAE-Cellulose離子交換柱和葡聚糖G-100凝膠柱進行了分離純化,并用紫外光譜全波長掃描對得到的多糖的純度進行了鑒定,隨后采用Sephadex G-100柱層析對純多糖
5、的分子量進行了研究。結(jié)果表明粗多糖用蒸餾水和0.1mol/LNaCl通過DEAE-Cellulose離子交換柱可以分為中性多糖和酸性多糖,用葡聚糖G-100凝膠柱對酸性多糖的純度進行了鑒定,得到單一的峰,紫外光譜掃描對酸性多糖進行全波長掃描,酸性多糖中不含蛋白質(zhì)和核酸,證明得到的酸性多糖為純多糖,測得純多糖的分子量是3.2X104Da。
采用氣相色譜對純多糖的結(jié)構(gòu)進行了初步研究。GC圖譜顯示純多糖是雜多糖,至少由葡萄糖、半乳糖
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