油脂高產(chǎn)菌株深黃被孢霉的誘變選育及發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化.pdf

1、 分類號 密級 UDC 編號 碩 士 學(xué) 位 論 文 油脂高產(chǎn)菌株深黃被孢霉的誘變選育及發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化 學(xué) 位 申 請 人： 人： 張鵬鵬 指 導(dǎo) 教 師： 師： 李市場 學(xué) 科 專 業(yè)： 業(yè)

2、： 生物化學(xué)與分子生物學(xué) 學(xué) 位 類 別： 別： 理學(xué)碩士 2013 年 5 月 摘 要 論文題目： 論文題目：油脂高產(chǎn)菌株 油脂高產(chǎn)菌株深黃被孢霉 深黃被孢霉的誘變 誘變選育 選育及發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu) 及發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化 專 業(yè)： 業(yè)： 生物化學(xué)與分子生物學(xué) 生物化學(xué)與分子生物學(xué) 研 究 生： 生： 張鵬鵬 張鵬鵬

3、 指導(dǎo)教師： 指導(dǎo)教師： 李市場 李市場 摘 要 油脂不僅是構(gòu)成和維持生命活動(dòng)的基本物質(zhì)，而且是一種重要的工業(yè)原料。隨著人口的快速增長，從動(dòng)植物獲取的油脂已無法滿足現(xiàn)階段的市場需求。因此，開發(fā)利用新油源——微生物油脂，具有重要的理論和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。 微生物油脂的脂肪酸組成與植物油脂相似，并富含多種不飽和脂肪酸，如花生四烯酸(AA)、γ-亞麻酸(GLA)、二十五碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)

4、等，具有較高的醫(yī)藥保健價(jià)值。目前，利用微生物生產(chǎn)油脂的成本較高，因此對微生物油脂的研究主要集中在生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的特殊營養(yǎng)油脂和特殊工業(yè)用油脂等功能性油脂。 與動(dòng)植物油脂相比，利用微生物生產(chǎn)油脂具有許多優(yōu)點(diǎn)，如微生物繁殖速度快、生長周期短、非常宜于工業(yè)化生產(chǎn)，油脂生產(chǎn)不受季節(jié)氣候變化的限制，生產(chǎn)原料豐富、廉價(jià)等。但是目前利用微生物生產(chǎn)油脂還有一定局限性，最顯著的缺陷就是微生物產(chǎn)油量低，生產(chǎn)成本較高。為了提高微生物產(chǎn)油量，實(shí)現(xiàn)其工業(yè)化應(yīng)用

5、，本文做了以下研究工作： 1. 本文以深黃被孢霉 As3.3410 為出發(fā)菌株，為了提高其產(chǎn)油量，利用紫外線、硫酸二乙酯、微波三種誘變手段，對出發(fā)菌株進(jìn)行誘變處理。結(jié)果表明，紫外誘變的最佳誘變時(shí)間為 20s；硫酸二乙酯的最佳誘變時(shí)間是 20min，最佳體積分?jǐn)?shù)為 0.8%；間歇式微波誘變最佳時(shí)間為 40s。比較三種誘變方法的優(yōu)缺點(diǎn)，選取紫外線和硫酸二乙酯為深黃被孢霉的最適誘變手段。 2. 為了建立一種高通量且快速簡便的突變菌株篩選方法，

6、本文嘗試?yán)弥舅岷铣擅敢种苿獪\藍(lán)菌素(curelenin)對誘變后的菌株進(jìn)行篩選。結(jié)果表明，curelenin 的最佳篩選濃度為 8.96× 10-6mol/L，篩選出高產(chǎn)突變菌株，并利用酸熱法測定其產(chǎn)油量，驗(yàn)證了 curelenin 抗性篩選法的準(zhǔn)確性。經(jīng)多次誘變篩選，最終篩選出一株油脂高產(chǎn)菌株 Z10，其產(chǎn)油量為 10.76g/L，比出發(fā)菌株(6.22g/L)提高了 73%。經(jīng)多代培養(yǎng)，高產(chǎn)菌株 Z10 的產(chǎn)油量變化