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文檔簡介
1、γ-亞麻酸(γ-linolenic acid, GLA)作為人體必需脂肪酸參與細胞膜的組成,是前列腺素(PG)、血栓素A2(TxA2)和白三烯(LT)的直接前體。對人體的激素調(diào)節(jié)和脂肪酸代謝也發(fā)揮著重要作用,尤其在心血管疾病、糖尿病并發(fā)癥、特征性濕疹、病毒感染以及癌癥等方面具有很好的預防與治療作用。傳統(tǒng)的γ-亞麻酸主要來源于植物,由于資源和環(huán)境的局限性近年來微生物法生產(chǎn)γ-亞麻酸的研究逐漸成為了熱門。
本文以深黃被孢霉As3.
2、3410為出發(fā)菌株,通過對紫外氯化鋰復合誘變和初篩條件的研究,建立了快速、便捷、高通量的誘變篩選體系。誘變條件,氯化鋰添加量3g/L,紫外誘變時間30s;初篩,馬來酰肼在培養(yǎng)基中的添加量為40mg/L,深黃被孢霉中脂肪酸脫氫酶酶活測定的條件為pH8.4、溫度35℃、紅四氮唑(TTC)添加量0.8%、時間1h。經(jīng)過反復誘變篩選獲得一株遺傳穩(wěn)定的γ-亞麻酸高產(chǎn)菌株F312。其γ-亞麻酸產(chǎn)量達到了1236mg/L,比出發(fā)菌株(725mg/L)
3、提高了70%。
研究深黃被孢霉產(chǎn)γ-亞麻酸過程的代謝調(diào)控,從中得出對深黃被孢霉產(chǎn)γ-亞麻酸有促進作用的營養(yǎng)成分,并利用Plackett-Burman實驗設(shè)計和響應面設(shè)計對培養(yǎng)基營養(yǎng)成分進行篩選優(yōu)化。Plackett-Burman實驗設(shè)計與統(tǒng)計分析表明:葡萄糖、KNO3、乙酸鈉、檸檬酸鈉為發(fā)酵的關(guān)鍵因素。以γ-亞麻酸產(chǎn)量為響應目標,對4因素進行中心旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計,并經(jīng)響應面法優(yōu)化分析得到影響γ-亞麻酸產(chǎn)量的二階模型,確定出四個關(guān)鍵
4、因素的最佳水平。綜合Plackett-Burman實驗設(shè)計和中心旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計得出最佳的培養(yǎng)基配方:葡萄糖100.90g/L、KNO31.57g/L、乙酸鈉3.42g/L、檸檬酸鈉4.56g/L、酵母膏3.75g/L、KH2PO42.25g/L、MgSO4?7H2O0.60g/L、CaCl20.30g/L、FeSO40.15g/L、ZnSO40.20g/L。在最佳條件下γ-亞麻酸產(chǎn)量達到了1500.73mg/L比誘變后產(chǎn)量1236mg/L
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