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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.建立血栓閉塞性脈管炎的動(dòng)物模型2.建立動(dòng)物血清中和肌肉組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達(dá)的檢測(cè)方法3.研究動(dòng)物血栓閉塞性脈管炎模型血清和肌肉組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達(dá)規(guī)律,為血栓閉塞性脈管炎病因和發(fā)病機(jī)制的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),從而為本病的治療方法和預(yù)后檢測(cè)提供新的思路。
方法:
1.Wistar大鼠35只隨機(jī)分為假手術(shù)組,1天,3天,1周,2周,3周,4周造模組,每組5只,術(shù)前均留取血
2、清標(biāo)本,通過(guò)向大鼠股動(dòng)脈注射月桂酸鈉,制造大鼠血栓閉塞性脈管炎模型,按照造模時(shí)間分批處死,假手術(shù)組于4周時(shí)處死,處死前留取術(shù)后血清標(biāo)本,并取左右后肢造模處周圍肌肉組織。
2.ELISA 法檢測(cè)造模前后血清中HIF-1α水平,免疫組化法半定量檢測(cè)造模后健側(cè)與患側(cè)肌肉組織中HIF-1α的表達(dá)。
3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:結(jié)果均用表示,統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用方差分析,兩兩比較采用LSD法,所有結(jié)果均由SPSS13.0軟件處理得出。<
3、br> 結(jié)果:
1.體征變化:各造模組大鼠均出現(xiàn)左后肢缺血表現(xiàn),依造模時(shí)間增加而逐漸加重,1天組、3天組均有左后肢缺血、腫脹、足趾發(fā)黑表現(xiàn)、1周組缺血表現(xiàn)加重、壞死范圍擴(kuò)大至踝部。2周組出現(xiàn)干性壞疽、壞死范圍至膝部,局部炎癥反應(yīng)明顯,3周、4周組有壞死肢體脫落表現(xiàn)嚴(yán)重者有肢體干性壞疽甚至肢體脫落。組織病理切片示:炎癥反應(yīng)明顯,炎癥細(xì)胞聚集,肌肉組織失去正常紋理結(jié)構(gòu),2、3、4周組股動(dòng)脈內(nèi)可見節(jié)段性閉塞,廣泛血管內(nèi)血栓
4、形成,并伴有大量新生毛細(xì)血管。大鼠體征變化及病理切片結(jié)果證實(shí),大鼠血栓閉塞性脈管炎模型建立成功。
2.血清檢測(cè)結(jié)果:所有造模組大鼠術(shù)后血清HIF-1α表達(dá)均高于術(shù)前,造模1天、3天組、1周組、2周組、3周組、4周組、術(shù)后血清HIF-1α表達(dá)水平分別與各組術(shù)前比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),假手術(shù)組造模前后HIF-1α血清表達(dá)水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),各造模組術(shù)后血清HIF-1α表達(dá)在1天組迅速升高,
5、3天時(shí)略降低,后逐漸下降,但均高于假手術(shù)組水平,其中1天與3天之間、1周與2周之間、3周與4周之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),其余造模組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
3.免疫組化結(jié)果:HIF-1α蛋白在假手術(shù)組雙側(cè)及造模組健側(cè)肌肉中低表達(dá),造模組患側(cè)肌肉組織中高表達(dá),各造模組患側(cè)HIF-1α蛋白表達(dá)的平均灰度值較健側(cè)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其中1天、3天組平均灰度值最低,兩組間比較差
6、異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),較其他造模組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),1周、2周組表達(dá)水平組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),較其他造模組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),3周、4周組組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),較其他造模組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:
1.采用股動(dòng)脈注射月桂酸鈉法制作TAO大鼠模型,方法簡(jiǎn)便,造模成功率高,可用于TAO的科學(xué)研究。
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