腫瘤標(biāo)志物免疫分析新方法與臨床應(yīng)用研究.pdf

1、揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文腫瘤標(biāo)志物免疫分析新方法與臨床應(yīng)用研究姓名：嚴(yán)楓申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：分析化學(xué)指導(dǎo)教師：胡效亞200506012癌胚抗原(CEA)的流動(dòng)注射一時(shí)間分辨熒光免疫分析新方法利用流動(dòng)注射的靈活性、時(shí)間分辨熒光分析技術(shù)的高靈敏度和免疫反應(yīng)的高特異性，建立了癌胚抗原(carcinoembryonicantigen，CEA)的流動(dòng)注射時(shí)I訓(xùn)分辨熒光免疫分析方法。首先用瓊脂糖凝膠固定CEA抗體制備免疫親和柱?；陔p抗體夾心反應(yīng)模

2、式，將癌胚抗原的抗原標(biāo)準(zhǔn)液或I臨床病人血清流經(jīng)免疫親和柱，免疫親和柱上的抗體結(jié)合樣品中CEA抗原，結(jié)合的量與樣品中抗原含量成難比。再注入稀土元素銪標(biāo)記CEA抗體，流經(jīng)免疫親和柱時(shí)形成“三明治”夾心免疫復(fù)合物，來結(jié)合的銪標(biāo)已CEA抗體流出。注入解離增強(qiáng)緩沖液，解離親和柱上CEA抗原所捕獲的抗體上的鋪并增強(qiáng)其熒光強(qiáng)度，用時(shí)間分辨熒光儀測定，熒光強(qiáng)度與CEA濃度呈正比。用陔方法檢測CEA，在25—100n∥ml范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為09

3、97，測定一個(gè)樣品需要25分鐘。用所建立的方法測定20，10和50ng／ml三種濃度的CEA血清標(biāo)本，每份重復(fù)測定10次，變異系數(shù)分別為35％，1O％和765％；測定24份臨床血清標(biāo)本與全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)(Elecsys睜2010瑞士羅氏)所測結(jié)果符合率良好。該方法基本實(shí)現(xiàn)了快速、經(jīng)濟(jì)、靈敏、準(zhǔn)確的要求，易于在不同級別醫(yī)院的普及，具有較好的應(yīng)用前景。3腫瘤標(biāo)志物的電化學(xué)與化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的研制與應(yīng)用提出了～種交聯(lián)殼聚糖膜固定CAl9

4、9抗原的新型CAl99化學(xué)發(fā)光免疫傳感器。采用非競爭免疫反應(yīng)模式，結(jié)合流動(dòng)注射分析技術(shù)，待測樣品與稍過量的辣根過氧化物酶標(biāo)記CAl99抗體離線溫育后，通入固定有CAl9—9化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的化學(xué)發(fā)光檢測池，在離線溫育混合液中未結(jié)合的酶標(biāo)抗體被捕獲而滯留在免疫傳感器內(nèi)，和隨后注入的魯米諾H202化學(xué)發(fā)光底物反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。在優(yōu)化條什下，化學(xué)發(fā)光信號強(qiáng)度的降低與CAl99濃度在20—25U／m[呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為O998，檢測限為1