生物標(biāo)志物的高靈敏檢測(cè)新方法研究.pdf

1、在臨床檢驗(yàn)中，生物標(biāo)志物的檢測(cè)日益受到檢驗(yàn)醫(yī)師和研究者的關(guān)注，成為近年來研究的熱點(diǎn)。本課題建立了測(cè)定腫瘤標(biāo)志物神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)全新的免疫學(xué)檢測(cè)新方法和乙醇代謝產(chǎn)物乙基葡萄糖醛酸苷的氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)新技術(shù)。主要研究內(nèi)容可分為以下兩部分：
　　1.基于功能化單壁碳納米管和金納米探針的免疫傳感器檢測(cè)血清中神經(jīng)元特異性烯醇化酶
　　本研究設(shè)計(jì)了一種基于NSE功能化單壁碳納米管的電化學(xué)免疫傳感器用來檢測(cè)小細(xì)胞肺癌標(biāo)志物

2、神經(jīng)元特異性烯醇化酶。功能化的單壁碳納米管不僅增加了電極表面的信號(hào)傳遞，同時(shí)也提供了大的比表面積，提供了使更多量的抗原固定位點(diǎn)以便免疫反應(yīng)中抗體的識(shí)別。加入了金納米粒子標(biāo)記的堿性磷酸酶標(biāo)二抗探針(AP-anti-IgG/AuNPs)，探針中的堿性磷酸酶催化底物產(chǎn)生還原反應(yīng)，明顯的放大了電化學(xué)信號(hào)。基于單壁碳納米管和金納米探針的雙信號(hào)放大作用，該傳感器的最低檢出限為0.033 ng/mL，線性范圍在0.1-2μg/mL之間，具有良好的精密

3、度和回收率，可直接定量檢測(cè)復(fù)雜血清中的靶蛋白。所構(gòu)建的傳感器突破了片面追求超高的靈敏度的檢測(cè)方法，在保持高靈敏的同時(shí)也增大了檢測(cè)的線性范圍，可對(duì)臨床樣本中高濃度的標(biāo)志物進(jìn)行直接檢測(cè)。為了驗(yàn)證方法的實(shí)用性，將此方法的檢測(cè)結(jié)果與臨床實(shí)驗(yàn)室常用的化學(xué)發(fā)光法比較發(fā)現(xiàn)這兩種方法有很好的相關(guān)性和重復(fù)性，這充分說明該方法在臨床應(yīng)用中有一定的潛力。
　　2.生物檢材中乙醇代謝產(chǎn)物乙基葡萄糖醛酸苷的氣相色譜質(zhì)譜檢測(cè)
　　在臨床檢驗(yàn)診斷和法醫(yī)鑒

4、定中判斷近期酒精的攝入情況主要是通過測(cè)定患者血液、尿液或呼氣中乙醇的濃度，但這種方法并不夠準(zhǔn)確，也存在著巨大的弊端，主要原因是乙醇在體內(nèi)代謝較快(0.1g/kg/h)，尤其是長期大量飲酒的患者代謝速率更快，飲酒后數(shù)小時(shí)血液中的乙醇便不能再被檢出，因此無法準(zhǔn)確判斷乙醇的飲用情況。
　　EtG是乙醇非氧化代謝途徑的直接代謝產(chǎn)物，是乙醇在尿苷二磷酸葡糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶的作用下與體內(nèi)具有活性的葡萄糖結(jié)合而生成的。乙醇在體內(nèi)消除后8小時(shí)EtG仍

5、然可以在血液中檢測(cè)到，消除后3-5天仍然可以在尿液中檢測(cè)到，因此EtG可以作為一個(gè)乙醇代謝的直接標(biāo)志物用于法醫(yī)鑒定中判斷酒后駕駛和臨床檢驗(yàn)中診斷慢性酒精性疾病。高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS)是目前檢測(cè)的EtG一種方法，本研究將氣相色譜質(zhì)譜技術(shù)與固相萃取技術(shù)相結(jié)合，創(chuàng)建了一種更為簡單、實(shí)用、廉價(jià)、高靈敏的氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)體液中乙基葡萄糖醛酸苷的新方法，該方法在100-3200 ng/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9